| 查看: 1884 | 回复: 13 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[求助]
测胡萝卜多酚氧化酶遇到的问题
|
|||
|
前阵子测胡萝卜多酚氧化酶活的时候遇到了如下问题： 1. 当我把酶液和底物混合在比色皿中以后，一开始吸光值正常的慢慢变大，再反应一会，吸光值逐渐变小，发现反应液开始分层。请教为什么反应液会分层。。。好纠结。。。 2. 实验室没有冷冻离心机，提取酶液的时候不冷冻离心会怎么样。。。 3. 看文献人家做实验会加PVP，这个东西的作用到底是什么？防止PPO氧化？每次做实验加PVP以后，反应液一旦混合颜色就好白好白。。吸光值太大了。。。 我的反应体系是0.5ml酶液+3ml底物（0.5M邻苯二酚溶于pH6.5 0.2M的磷酸缓冲液）  2013-04-13 17.04.57.jpg |
回复此楼» 猜你喜欢
【实验干货】生物超薄切片+HRTEM：线粒体嵴原子像一步到位
已经有0人回复
-
食品专业论文投稿请教
已经有0人回复
-
食品科学论文润色/翻译怎么收费?
已经有148人回复
-
分享食品专业书籍《Fundamentals of Food Process Engineering》，以学习目的为主。
已经有2人回复
-
Biomass Conversion and Biorefinery
已经有4人回复
-
893食品工程调剂求助
已经有0人回复
-
食品考研交流
已经有12人回复
-
食品学硕290可以调剂到哪里去。求助
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 关于测定笋的多酚氧化酶PPO活性的问题
已经有14人回复
小毛孩24
专家顾问 (职业作家)
-
专家经验: +383 - 食品EPI: 7
- 应助: 501 (博士)
- 贵宾: 0.029
- 金币: 1459.6
- 散金: 15124
- 红花: 75
- 帖子: 4433
- 在线: 782.9小时
- 虫号: 1230465
- 注册: 2011-03-12
- 专业: 食品科学基础
- 管辖: 食品
4楼2013-04-24 16:29:47
Alexalex19
木虫 (著名写手)
- 应助: 51 (初中生)
- 金币: 4550.1
- 散金: 33
- 红花: 4
- 帖子: 2062
- 在线: 614.4小时
- 虫号: 2291085
- 注册: 2013-02-21
- 专业: 金属功能材料
2楼2013-04-23 17:40:24
user59888
金虫 (文坛精英)
宫创始人 ------小妮
- 食品EPI: 15
- 应助: 461 (硕士)
- 贵宾: 0.463
- 金币: 1221.8
- 散金: 38093
- 红花: 1140
- 沙发: 950
- 帖子: 40334
- 在线: 1737.1小时
- 虫号: 1737174
- 注册: 2012-04-05
- 专业: 食品加工技术
【答案】应助回帖
感谢参与，应助指数 +1
|
1. 粗酶液的制备 称取马铃薯块茎5g于研钵中，加入0.5g 不溶性聚乙烯吡咯烷酮（事先用蒸馏水浸洗，然后过滤以除去杂质）和100ml 0.1mol•L－1pH6.5磷酸缓冲液,磨成匀浆，用几层纱布袋过滤，滤液加入30%饱和度硫酸铵，离心除沉淀，上清液再加硫酸铵使达60％饱和度，离心收集沉淀。将所得沉淀溶于2～3ml 0.01mol•L－1 pH6.5磷酸缓冲液中，即为粗制酶液。 2. 活性酶的测定 在试管中加入3.9ml 0.05 mol•L－1 pH5.5磷酸缓冲液，1.0ml 0.1 mol•L－1儿茶酚在37℃恒温水浴中保温10min ，然后加入0.5ml酶液（可视酶活性增减用量），迅速摇匀，倒入比色杯内，于525nm波长处以时间扫描方式，在1～2min内测定吸光度变化（A）值。 五、酶活性的计算 以每min内A525值变化0.01为1个酶活力单位，按下式计算多酚氧化酶的活力和比活性。 A 酶提取液总量（ml） 酶活力（0.01A•min－1）＝———————×——————————— 0.01×反应时间 测定时酶液用量（ml） A 酶提取液总量（ml） 酶的比活性(0.01A•g－1Fw•min)＝—————————×—————————— 0.01×W×反应时间 测定时酶液用量（ml） 公式中：A — 为反应时间内吸光度的变化值；W为样品鲜重（g）。你按这个试一试，不行在交流 |
3楼2013-04-23 22:37:36
小毛孩24
专家顾问 (职业作家)
-
专家经验: +383 - 食品EPI: 7
- 应助: 501 (博士)
- 贵宾: 0.029
- 金币: 1459.6
- 散金: 15124
- 红花: 75
- 帖子: 4433
- 在线: 782.9小时
- 虫号: 1230465
- 注册: 2011-03-12
- 专业: 食品科学基础
- 管辖: 食品
5楼2013-04-24 16:33:11
10