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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 亲和素磁珠上DNA的洗脱
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liulanhua

金虫 (正式写手)

[求助] 亲和素磁珠上DNA的洗脱

各位虫友，我最近用亲和素磁珠连接上带生物素的DNA探针，然后与互补链杂交，但是杂交后怎么把杂交上的DNA互补链再洗脱下来啊? 各位做过相关实验的帮帮忙啊
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努力会有收获！
1楼 2013-04-23 14:33:34
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panyuzhu

禁虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
liulanhua: 金币+10 2013-04-24 09:04:16
gyesang: 金币+1, 鼓励应助！ 2013-04-24 20:00:15
本帖内容被屏蔽
2楼2013-04-23 18:09:44
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liulanhua

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by panyuzhu at 2013-04-23 18:09:44
是不是想拉成单链啊，加终浓度为0.2M NaoH，孵育一小会，然后离心。磁珠结合的是带生物素的那条，上清是另外一条。有什么不懂的，再联系

用0.2M的NaOH不会破坏亲和素吗？亲和素不是蛋白嘛，强碱会不会使亲和素变性，从而使带生物素的DNA也洗下来啊?
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努力会有收获！
3楼2013-04-24 09:03:58
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panyuzhu

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
4楼2013-04-24 10:32:53
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liulanhua

金虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by panyuzhu at 2013-04-24 10:32:53
你的是不是卵白素偶联的琼脂糖树脂与生物素偶联的DNA结合？

我用的是链酶亲和素磁珠，上面连上带生物素的DNA探针，然后与互补链进行杂交，我想把杂交上去的互补链能洗脱下来使DNA探针能重复利用，这就要求洗脱液既能把杂交链洗脱下来，有保证亲和素生物素的作用力不被破坏。
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努力会有收获！
5楼2013-04-24 11:12:46
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panyuzhu

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
6楼2013-04-24 19:11:30
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847037274

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by liulanhua at 2013-04-24 11:12:46
我用的是链酶亲和素磁珠，上面连上带生物素的DNA探针，然后与互补链进行杂交，我想把杂交上去的互补链能洗脱下来使DNA探针能重复利用，这就要求洗脱液既能把杂交链洗脱下来，有保证亲和素生物素的作用力不被破坏。...

请问这个问题解决了吗？我也有这个疑惑，在线等答复，谢谢
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7楼2014-09-06 10:33:31
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liulanhua

金虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 847037274 at 2014-09-06 10:33:31
请问这个问题解决了吗？我也有这个疑惑，在线等答复，谢谢...

没有解决
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努力会有收获！
8楼2014-09-06 13:04:50
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盈月泛星

铜虫 (初入文坛)
大家好，我最近也在做磁珠纯化单链的实验 请问如何验证有亲和素被破坏呢 ？ 洗脱下来的DNA 经过乙醇沉淀还是柱纯化？其中会不会有蛋白 经过OD检测会准确吗？ 望回复啊 谢谢
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考研也要加紧联系群体
9楼2014-10-22 10:13:09
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小鱼儿爱你啦

新虫 (小有名气)
亲和素磁珠连接上带生物素的DNA探针，然后与互补链杂交，互补链什么样的条件可以杂交上去？谢谢
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10楼2016-03-22 11:10:43
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