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三书生

木虫 (正式写手)

[求助] 求教昆虫细胞培养问题

各位师兄师姐,师弟师妹,大家好。
本人小硕一枚,刚刚接触细胞培养,贴壁生长的昆虫细胞,用添加10%血清的培养基培养,最近细胞出现了一些问题,在此向大家请教一下几个问题。

1.2张图片中的细胞生长状态不好,很多亮点,这个是要凋亡了吧?

2.图片中可以看到很多细小的黑点(就像灰烬一样的东西)。在倒置显微镜下这些小黑点有的不动,有的会不停的移动,请问这些小黑点是什么?为什么会动?

3.我一直比较疑惑的一个问题。在血清、不添加血清的培养基、添加血清的培养基都没有被污染的情况下,所有细胞都被污染了,无一幸免。有人可能说是操作的问题,但是我们一直都是执行以前的管理和操作,在这方面应该问题不大吧。而且如果因为操作而引起污染的话,那么污染应该是偶然现象不应该是大概率事件啊(全部污染)。交叉污染?我们做实验的时候一般都会采取更换吹管、灼烧瓶口等预防措施。但是现在这种污染不是出现一次两次,而是多次出现,请问这个是什么原因,有何良策?

谢谢!谢谢各位了!

20倍镜.JPG



10倍镜.jpg
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好问蚂蚁

新虫 (小有名气)

有时候培养昆虫细胞不需要加血清,这与剪切力有关,再看看你的试剂盒说明书。
7楼2015-09-29 21:45:26
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查看全部 8 个回答

nlbtr

铜虫 (小有名气)

感谢参与,应助指数 +1
wizardfan: 应助指数-1, 屏蔽内容, 有广告嫌疑,请详细说明为什么判断细胞有问题 2013-04-24 06:50:51
本帖内容被屏蔽

2楼2013-04-23 10:58:49
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chyanqiu

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
wizardfan: 金币+5, BioEPI+1, 谢谢分析,以后常来 2013-04-24 06:55:06
三书生: 金币+4, ★★★★★最佳答案, 基本解答了我的疑问,谢谢! 2013-04-25 09:54:15
1、亮亮的圆形应该是没有贴壁的细胞,可能暂时没贴壁,也可能是已经死亡;
2、黑色的小点,如果是游来游去的,应该是细菌污染,如果是原地打转,可能是黑胶虫。

如果你试过在干净的培养瓶中,没有细胞,只有培养基或者血清,像养细胞一样在37℃培养箱中过夜后,不会出现黑色小点的话,应该是您买的细胞本身是污染的
3楼2013-04-23 13:18:31
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小雨莎莎

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
wizardfan: 金币+3, 谢谢分享经验 2013-04-24 06:55:25
三书生: 金币+1, ★★★很有帮助, 分析的很好,谢谢!以后常交流! 2013-04-25 09:55:19
我们也养sf-9,不知道你们传代是怎么做的,我们是用细胞刮刀的,所以每一次传代的话刮一次就损伤一次,因此第二天会看到皿底部会有很多黑色的碎片,我看着跟你的图片的小黑点有点像,这个细胞贴壁比较慢,因此我们一般都是传代之后至少等两天才会换液的。另外就是这个细胞很容易污染,所以我们一般都用双倍的双抗加入培养基中。我们的培养基是自己溶解过滤的TC-100培养基
4楼2013-04-23 19:20:50
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