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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求教昆虫细胞培养问题
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三书生

木虫 (正式写手)

[求助] 求教昆虫细胞培养问题

各位师兄师姐，师弟师妹，大家好。
本人小硕一枚，刚刚接触细胞培养，贴壁生长的昆虫细胞，用添加10%血清的培养基培养，最近细胞出现了一些问题，在此向大家请教一下几个问题。

1.2张图片中的细胞生长状态不好，很多亮点，这个是要凋亡了吧？

2.图片中可以看到很多细小的黑点（就像灰烬一样的东西）。在倒置显微镜下这些小黑点有的不动，有的会不停的移动，请问这些小黑点是什么？为什么会动？

3.我一直比较疑惑的一个问题。在血清、不添加血清的培养基、添加血清的培养基都没有被污染的情况下，所有细胞都被污染了，无一幸免。有人可能说是操作的问题，但是我们一直都是执行以前的管理和操作，在这方面应该问题不大吧。而且如果因为操作而引起污染的话，那么污染应该是偶然现象不应该是大概率事件啊（全部污染）。交叉污染？我们做实验的时候一般都会采取更换吹管、灼烧瓶口等预防措施。但是现在这种污染不是出现一次两次，而是多次出现，请问这个是什么原因，有何良策？

谢谢！谢谢各位了！

20倍镜.JPG



10倍镜.jpg
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1楼 2013-04-23 10:21:09
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chyanqiu

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+5, BioEPI+1, 谢谢分析，以后常来 2013-04-24 06:55:06
三书生: 金币+4, ★★★★★最佳答案, 基本解答了我的疑问，谢谢！ 2013-04-25 09:54:15
1、亮亮的圆形应该是没有贴壁的细胞，可能暂时没贴壁，也可能是已经死亡；
2、黑色的小点，如果是游来游去的，应该是细菌污染，如果是原地打转，可能是黑胶虫。

如果你试过在干净的培养瓶中，没有细胞，只有培养基或者血清，像养细胞一样在37℃培养箱中过夜后，不会出现黑色小点的话，应该是您买的细胞本身是污染的
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3楼2013-04-23 13:18:31
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nlbtr

铜虫 (小有名气)
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 应助指数-1, 屏蔽内容, 有广告嫌疑，请详细说明为什么判断细胞有问题 2013-04-24 06:50:51
本帖内容被屏蔽
2楼2013-04-23 10:58:49
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小雨莎莎

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+3, 谢谢分享经验 2013-04-24 06:55:25
三书生: 金币+1, ★★★很有帮助, 分析的很好，谢谢！以后常交流！ 2013-04-25 09:55:19
我们也养sf-9，不知道你们传代是怎么做的，我们是用细胞刮刀的，所以每一次传代的话刮一次就损伤一次，因此第二天会看到皿底部会有很多黑色的碎片，我看着跟你的图片的小黑点有点像，这个细胞贴壁比较慢，因此我们一般都是传代之后至少等两天才会换液的。另外就是这个细胞很容易污染，所以我们一般都用双倍的双抗加入培养基中。我们的培养基是自己溶解过滤的TC-100培养基
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4楼2013-04-23 19:20:50
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syt_wuhan

金虫 (初入文坛)
我之前养的都是细胞株，这次到新的公司养昆虫细胞SF9、SF21、Hight 5，不用胰酶消化，老板让用手拍瓶壁，在实验室里养，只有操作台照紫外，外面是空旷的实验室，都不照紫外，不过没污染，也不加双抗培养基里，自己都觉得很庆幸。
1.黑点，应该是是污染，如果培养基变黄等，可能是细菌，会大量繁殖的。小黑点一般认为是黑胶虫，也得看情况，血清买好点的吧，进口或分装的，国内的还是不要用，要不就灭活，分装后在菌试看看。
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5楼2013-06-05 14:35:52
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