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随波逐刘

新虫 (小有名气)

[求助] 我这样算是在构建cDNA文库吗?

植物组织总RNA中分离得到了mRNA,用M-MLV RTase cDNA Synthesis Kit(TAKARA)直接合成双链cDNA,用cDNA PCR Library Kit(TAKARA)加接头,扩增了这些ds cDNA,PCR产物纯化后直接和T载体连接,转到大肠杆菌里培养,筛选。请问,这样子,算是构建了cDNA文库吗?
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panyuzhu

禁虫 (小有名气)

本帖内容被屏蔽

2楼2013-04-21 17:18:21
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随波逐刘

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by panyuzhu at 2013-04-21 17:18:21
是要炫耀还是咋的,你都已经做了

额,还没做呢,只是这样想的。这样子的试剂盒才2000左右,看文献上一般用SMARTER,要1w,不知道这样子行不行。。。
3楼2013-04-21 17:24:34
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hyphen007

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

最近也要做cDNA文库,现在很纠结,不知道用那个kit,想自己买试剂做,又不知怎么搭配,不知楼主的方法可否?
4楼2013-07-10 16:55:02
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hyphen007

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

请问楼主,你做了吗?结果怎么样了?请赐教啊,
5楼2013-07-10 16:56:09
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hyphen007

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

文库是不是还要质量检测什么的一下,算算滴度什么的,貌似?
6楼2013-07-10 18:35:58
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随波逐刘

新虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by hyphen007 at 2013-07-10 18:35:58
文库是不是还要质量检测什么的一下,算算滴度什么的,貌似?

正在进行呢,在酶切上卡住了,伤不起
7楼2013-07-11 08:36:33
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匿名

用户注销 (小有名气)

本帖仅楼主可见
8楼2013-10-16 19:51:10
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随波逐刘

新虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by zq191236086 at 2013-10-16 19:51:10
您好,我最近也要构建cDNA文库,也不知要买什么试剂盒,请问你现在怎么做的,买的什么试剂盒啊?
    我现在和当时你的心情一样,请赐教啊。浪费你的时间了,真的很感谢您...

我做的是消减杂交cDNA文库,已经结束了。。。差减杂交购买的是clontech的试剂盒,分离mRNA买的是promega的磁力架分离系统,后面都是小东西,胶回收试剂盒、质粒载体都是promego的产品,不贵质量也挺好!
9楼2013-10-17 10:20:19
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文库构建

铁虫 (小有名气)


【答案】应助回帖

这么多做C库的,有没有做BAC文库的啊,一起探讨一下。
10楼2013-10-28 11:51:02
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