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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【cDNA文库构建】为什么合成的双链cDNA加完接头后需要磷酸化？
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通缉要饭

金虫 (著名写手)

[交流] 【cDNA文库构建】为什么合成的双链cDNA加完接头后需要磷酸化？ 已有2人参与

如题，谢谢了
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1楼 2012-12-09 01:02:34
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
为了把cDNA克隆到载体里面去分析。为了减少载体自连，载体分子一般是去掉5'P的，未磷酸化的目的片段无法与载体连接。
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2楼2012-12-09 02:53:01
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panchen0527

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
这是由于合成产物末端未-OH基团，直接连接效率很低，磷酸化是为了提高连接效率。
如您的合成双链本身是带有5‘磷酸化修饰，或者带有完整的酶切位点，经切割后连接，那么就没有必要再做磷酸化修饰了
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3楼2012-12-09 12:48:03
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通缉要饭

金虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by panchen0527 at 2012-12-09 12:48:03
这是由于合成产物末端未-OH基团，直接连接效率很低，磷酸化是为了提高连接效率。
如您的合成双链本身是带有5‘磷酸化修饰，或者带有完整的酶切位点，经切割后连接，那么就没有必要再做磷酸化修饰了

谢谢！
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4楼2012-12-09 18:56:52
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通缉要饭

金虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-12-09 02:53:01
为了把cDNA克隆到载体里面去分析。为了减少载体自连，载体分子一般是去掉5'P的，未磷酸化的目的片段无法与载体连接。

谢谢！
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5楼2012-12-09 18:57:35
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