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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 材料区 » 生物材料 » 材料表征测试 » 细胞电镜制样梯度乙醇脱水后可以直接冷冻干燥吗？
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_xiaoniu_

木虫 (小有名气)

[求助] 细胞电镜制样梯度乙醇脱水后可以直接冷冻干燥吗？

在细胞电镜制样过程中，得到细胞后用戊二醛固定及梯度乙醇脱水后，直接在100%乙醇中冷冻干燥可以吗？看到有人说要用乙酸异戊酯等易挥发溶剂置换后干燥，弱弱的问一句，乙醇不就是易挥发的么？还有锇酸和电镜观察之前的喷金处理有什么不同，是不是锇酸固定后就不用喷金了，喷金的话就不用用锇酸固定了呢？本人新手，欢迎各位前辈指教!
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1楼 2013-04-20 17:16:43
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_xiaoniu_

木虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by lark001 at 2013-04-21 15:35:21
一般用梯度乙醇脱水后，要倒掉乙醇的，然后再冷冻干燥。是否用叔丁醇或者乙酸异戊酯置换，没做过，估计这两种物质可以置换出细胞中剩余水分的位置，起到支撑细胞的作用，虫友样品多的话，直接干燥和置换后再干燥不 ...

之前做的时候是这么做的，将纯乙醇倒掉，然后直接冷冻干燥，做出来的结果如图，将内皮细胞是放在硅片上，用戊二醛固定，梯度乙醇脱水然后冷冻干燥后观察，得到的结果如下图，衬底上一片一片的似乎是一层什么东西盖在上面，是铺展的细胞还是别的什么，不知道这是不是制样的问题，还望指教！

网上下载细胞.jpg



cell_m001.jpg



cell_m005.jpg
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9楼2013-04-21 22:32:17
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lark001

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
红舟流星: 金币+2, 欢迎来生物材料板块应助交流 2013-04-21 12:31:57
_xiaoniu_: 金币+10, ★★★很有帮助 2013-04-22 20:27:45
（1）细胞用戊二醛固定及梯度乙醇脱水后，是否冷冻干燥，要看用哪种电镜观察：
        如果用扫描电镜观察，一般要冷冻干燥，这是在抽真空状态下观察样品，必须完全干燥样品；
        如果用透射电镜观察，则不需要冷冻干燥的，因为后续还要用树脂渗透、包埋等处理。
（2）细胞一般不导电，所以在用扫描电镜观察时用到喷金处理，增加样品导电性和分辨性能；
       而透射电镜样品处理中，包埋之后、要有切片、染色（枸橼酸铅和醋酸铀负染）等步骤，则不需要喷金处理，当然，也有不染色的，细胞颜色淡一些，影响观察，不过对于做EDX有利。
  （3）锇酸一般是后固定用的，看要求了。
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2楼2013-04-21 12:08:40
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_xiaoniu_

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by lark001 at 2013-04-21 12:08:40
（1）细胞用戊二醛固定及梯度乙醇脱水后，是否冷冻干燥，要看用哪种电镜观察：
        如果用扫描电镜观察，一般要冷冻干燥，这是在抽真空状态下观察样品，必须完全干燥样品；
        如果用透射电镜观察，则不 ...

谢谢，准备要用扫描电镜观察，梯度乙醇脱水后，冷冻干燥之前要用叔丁醇或者乙酸异戊酯置换吗？直接在乙醇中冷冻干燥可以吗？
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4楼2013-04-21 13:46:14
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bluern

木虫 (著名写手)

貌似那两种试剂不贵把。要不这么省~~

楼上的回答真好。
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5楼2013-04-21 15:13:18
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