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_xiaoniu_

木虫 (小有名气)

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[求助] 细胞电镜制样梯度乙醇脱水后可以直接冷冻干燥吗？

在细胞电镜制样过程中，得到细胞后用戊二醛固定及梯度乙醇脱水后，直接在100%乙醇中冷冻干燥可以吗？看到有人说要用乙酸异戊酯等易挥发溶剂置换后干燥，弱弱的问一句，乙醇不就是易挥发的么？还有锇酸和电镜观察之前的喷金处理有什么不同，是不是锇酸固定后就不用喷金了，喷金的话就不用用锇酸固定了呢？本人新手，欢迎各位前辈指教!

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1楼2013-04-20 17:16:43

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bluern

木虫 (著名写手)

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貌似那两种试剂不贵把。要不这么省~~

楼上的回答真好。

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5楼2013-04-21 15:13:18

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lark001

新虫 (小有名气)

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
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红舟流星: 金币+2, 欢迎来生物材料板块应助交流 2013-04-21 12:31:57
_xiaoniu_: 金币+10, ★★★很有帮助 2013-04-22 20:27:45

（1）细胞用戊二醛固定及梯度乙醇脱水后，是否冷冻干燥，要看用哪种电镜观察：
      如果用扫描电镜观察，一般要冷冻干燥，这是在抽真空状态下观察样品，必须完全干燥样品；
      如果用透射电镜观察，则不需要冷冻干燥的，因为后续还要用树脂渗透、包埋等处理。
（2）细胞一般不导电，所以在用扫描电镜观察时用到喷金处理，增加样品导电性和分辨性能；
   而透射电镜样品处理中，包埋之后、要有切片、染色（枸橼酸铅和醋酸铀负染）等步骤，则不需要喷金处理，当然，也有不染色的，细胞颜色淡一些，影响观察，不过对于做EDX有利。
  （3）锇酸一般是后固定用的，看要求了。

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2楼2013-04-21 12:08:40

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_xiaoniu_

木虫 (小有名气)

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引用回帖:

2楼: Originally posted by lark001 at 2013-04-21 12:08:40
（1）细胞用戊二醛固定及梯度乙醇脱水后，是否冷冻干燥，要看用哪种电镜观察：
如果用扫描电镜观察，一般要冷冻干燥，这是在抽真空状态下观察样品，必须完全干燥样品；
如果用透射电镜观察，则不 ...

谢谢，准备要用扫描电镜观察，梯度乙醇脱水后，冷冻干燥之前要用叔丁醇或者乙酸异戊酯置换吗？直接在乙醇中冷冻干燥可以吗？

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4楼2013-04-21 13:46:14

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