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丸子一百分

新虫 (初入文坛)

[求助] TA克隆

PCR产物有引物二聚体   能做TA克隆么
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1楼 2013-04-19 08:44:21
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德国工兵铲

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
产物回收不就可以了，做TA克隆回收一下产物成功率高啊。

PCR产物都是有点引物二聚体的
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2楼2013-04-19 08:53:19
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丸子一百分

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 德国工兵铲 at 2013-04-19 08:53:19
产物回收不就可以了，做TA克隆回收一下产物成功率高啊。

PCR产物都是有点引物二聚体的

用相同的材料和程序PCR的  再做就扩不出来了  第一次扩出来了  求解
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3楼2013-04-19 08:55:45
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德国工兵铲

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 丸子一百分 at 2013-04-19 08:55:45
用相同的材料和程序PCR的  再做就扩不出来了  第一次扩出来了  求解...

1 确定一下模板、引物、DNTP有没有降解，水有没有被污染。

2 用第一次产物做模板（先稀释50倍）

3 如果你怀疑酶或者MIX失活的话，可以让别人使用一下确定有没有问题。
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4楼2013-04-19 09:14:57
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wangqi1107

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
确定和上一次做的用的东西全部一样？什么东西都没改变？不要想当然认为某种东西没问题，要有试验根据。也可以把图片发过来看看。
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5楼2013-04-19 15:00:17
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丸子一百分

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by wangqi1107 at 2013-04-19 15:00:17
确定和上一次做的用的东西全部一样？什么东西都没改变？不要想当然认为某种东西没问题，要有试验根据。也可以把图片发过来看看。

DNA还是那一批的   酶是一样的  引物也是一样的  程序也是   PCR之后电泳就是没有条带  该有条带的那个地方很暗  马克很亮  有引物二聚体
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6楼2013-04-19 20:54:43
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丸子一百分

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 德国工兵铲 at 2013-04-19 09:14:57
1 确定一下模板、引物、DNTP有没有降解，水有没有被污染。

2 用第一次产物做模板（先稀释50倍）

3 如果你怀疑酶或者MIX失活的话，可以让别人使用一下确定有没有问题。...

第一次的产物做模板  为什么要稀释50倍呢   我是菜鸟  求解  第一次没有条带  稀释后不就模板量更少了么
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7楼2013-04-19 20:55:51
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丸子一百分

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by wangqi1107 at 2013-04-19 15:00:17
确定和上一次做的用的东西全部一样？什么东西都没改变？不要想当然认为某种东西没问题，要有试验根据。也可以把图片发过来看看。

用的是荧光定量的EX Taq酶    体系是模板2微升  酶10微升  引物各1微升  加水到20微升  按照说明书上的体系   程序是95度30秒   然后95度5秒 55度30秒 四十个循环    然后60度两分钟  最后4度
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8楼2013-04-19 20:58:10
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丸子一百分

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 德国工兵铲 at 2013-04-19 09:14:57
1 确定一下模板、引物、DNTP有没有降解，水有没有被污染。

2 用第一次产物做模板（先稀释50倍）

3 如果你怀疑酶或者MIX失活的话，可以让别人使用一下确定有没有问题。...

用的是荧光定量的EX Taq酶    体系是模板2微升  酶10微升  引物各1微升  加水到20微升  按照说明书上的体系   程序是95度30秒   然后95度5秒 55度30秒 四十个循环    然后60度两分钟  最后4度
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9楼2013-04-19 20:59:03
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