应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » TA克隆
91/1返回列表
查看: 462  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

丸子一百分

新虫 (初入文坛)

[求助] TA克隆

PCR产物有引物二聚体   能做TA克隆么
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2013-04-19 08:44:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

德国工兵铲

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
产物回收不就可以了，做TA克隆回收一下产物成功率高啊。

PCR产物都是有点引物二聚体的
赞一下 回复此楼
2楼2013-04-19 08:53:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

丸子一百分

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 德国工兵铲 at 2013-04-19 08:53:19
产物回收不就可以了，做TA克隆回收一下产物成功率高啊。

PCR产物都是有点引物二聚体的

用相同的材料和程序PCR的  再做就扩不出来了  第一次扩出来了  求解
赞一下 回复此楼
3楼2013-04-19 08:55:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

德国工兵铲

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 丸子一百分 at 2013-04-19 08:55:45
用相同的材料和程序PCR的  再做就扩不出来了  第一次扩出来了  求解...

1 确定一下模板、引物、DNTP有没有降解，水有没有被污染。

2 用第一次产物做模板（先稀释50倍）

3 如果你怀疑酶或者MIX失活的话，可以让别人使用一下确定有没有问题。
赞一下 回复此楼
4楼2013-04-19 09:14:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangqi1107

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
确定和上一次做的用的东西全部一样？什么东西都没改变？不要想当然认为某种东西没问题，要有试验根据。也可以把图片发过来看看。
赞一下 回复此楼
5楼2013-04-19 15:00:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

丸子一百分

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by wangqi1107 at 2013-04-19 15:00:17
确定和上一次做的用的东西全部一样？什么东西都没改变？不要想当然认为某种东西没问题，要有试验根据。也可以把图片发过来看看。

DNA还是那一批的   酶是一样的  引物也是一样的  程序也是   PCR之后电泳就是没有条带  该有条带的那个地方很暗  马克很亮  有引物二聚体
赞一下 回复此楼
6楼2013-04-19 20:54:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

丸子一百分

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 德国工兵铲 at 2013-04-19 09:14:57
1 确定一下模板、引物、DNTP有没有降解，水有没有被污染。

2 用第一次产物做模板（先稀释50倍）

3 如果你怀疑酶或者MIX失活的话，可以让别人使用一下确定有没有问题。...

第一次的产物做模板  为什么要稀释50倍呢   我是菜鸟  求解  第一次没有条带  稀释后不就模板量更少了么
赞一下 回复此楼
7楼2013-04-19 20:55:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

丸子一百分

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by wangqi1107 at 2013-04-19 15:00:17
确定和上一次做的用的东西全部一样？什么东西都没改变？不要想当然认为某种东西没问题，要有试验根据。也可以把图片发过来看看。

用的是荧光定量的EX Taq酶    体系是模板2微升  酶10微升  引物各1微升  加水到20微升  按照说明书上的体系   程序是95度30秒   然后95度5秒 55度30秒 四十个循环    然后60度两分钟  最后4度
赞一下 回复此楼
8楼2013-04-19 20:58:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

丸子一百分

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 德国工兵铲 at 2013-04-19 09:14:57
1 确定一下模板、引物、DNTP有没有降解，水有没有被污染。

2 用第一次产物做模板（先稀释50倍）

3 如果你怀疑酶或者MIX失活的话，可以让别人使用一下确定有没有问题。...

用的是荧光定量的EX Taq酶    体系是模板2微升  酶10微升  引物各1微升  加水到20微升  按照说明书上的体系   程序是95度30秒   然后95度5秒 55度30秒 四十个循环    然后60度两分钟  最后4度
赞一下 回复此楼
9楼2013-04-19 20:59:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 丸子一百分 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭