应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » TA克隆
91/1返回列表
查看: 561  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

丸子一百分

新虫 (初入文坛)

[求助] TA克隆

PCR产物有引物二聚体   能做TA克隆么
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2013-04-19 08:44:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

德国工兵铲

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
产物回收不就可以了，做TA克隆回收一下产物成功率高啊。

PCR产物都是有点引物二聚体的
赞一下 回复此楼
2楼2013-04-19 08:53:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

丸子一百分

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 德国工兵铲 at 2013-04-19 08:53:19
产物回收不就可以了，做TA克隆回收一下产物成功率高啊。

PCR产物都是有点引物二聚体的

用相同的材料和程序PCR的  再做就扩不出来了  第一次扩出来了  求解
赞一下 回复此楼
3楼2013-04-19 08:55:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

德国工兵铲

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 丸子一百分 at 2013-04-19 08:55:45
用相同的材料和程序PCR的  再做就扩不出来了  第一次扩出来了  求解...

1 确定一下模板、引物、DNTP有没有降解，水有没有被污染。

2 用第一次产物做模板（先稀释50倍）

3 如果你怀疑酶或者MIX失活的话，可以让别人使用一下确定有没有问题。
赞一下 回复此楼
4楼2013-04-19 09:14:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangqi1107

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
确定和上一次做的用的东西全部一样？什么东西都没改变？不要想当然认为某种东西没问题，要有试验根据。也可以把图片发过来看看。
赞一下 回复此楼
5楼2013-04-19 15:00:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

丸子一百分

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by wangqi1107 at 2013-04-19 15:00:17
确定和上一次做的用的东西全部一样？什么东西都没改变？不要想当然认为某种东西没问题，要有试验根据。也可以把图片发过来看看。

DNA还是那一批的   酶是一样的  引物也是一样的  程序也是   PCR之后电泳就是没有条带  该有条带的那个地方很暗  马克很亮  有引物二聚体
赞一下 回复此楼
6楼2013-04-19 20:54:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

丸子一百分

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 德国工兵铲 at 2013-04-19 09:14:57
1 确定一下模板、引物、DNTP有没有降解，水有没有被污染。

2 用第一次产物做模板（先稀释50倍）

3 如果你怀疑酶或者MIX失活的话，可以让别人使用一下确定有没有问题。...

第一次的产物做模板  为什么要稀释50倍呢   我是菜鸟  求解  第一次没有条带  稀释后不就模板量更少了么
赞一下 回复此楼
7楼2013-04-19 20:55:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

丸子一百分

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by wangqi1107 at 2013-04-19 15:00:17
确定和上一次做的用的东西全部一样？什么东西都没改变？不要想当然认为某种东西没问题，要有试验根据。也可以把图片发过来看看。

用的是荧光定量的EX Taq酶    体系是模板2微升  酶10微升  引物各1微升  加水到20微升  按照说明书上的体系   程序是95度30秒   然后95度5秒 55度30秒 四十个循环    然后60度两分钟  最后4度
赞一下 回复此楼
8楼2013-04-19 20:58:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

丸子一百分

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 德国工兵铲 at 2013-04-19 09:14:57
1 确定一下模板、引物、DNTP有没有降解，水有没有被污染。

2 用第一次产物做模板（先稀释50倍）

3 如果你怀疑酶或者MIX失活的话，可以让别人使用一下确定有没有问题。...

用的是荧光定量的EX Taq酶    体系是模板2微升  酶10微升  引物各1微升  加水到20微升  按照说明书上的体系   程序是95度30秒   然后95度5秒 55度30秒 四十个循环    然后60度两分钟  最后4度
赞一下 回复此楼
9楼2013-04-19 20:59:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 丸子一百分 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 投票:  有多少人是今天查系统知道结果的？ +17 爱看书的可乐 2026-08-26 19/950 2026-09-02 00:19 by xiangy672
[基金申请] 为什么国自然不能直接公布 +5 bjdxyxy 2026-08-26 5/250 2026-09-01 17:54 by 小伟大博士
[基金申请] 学科评审组评审是指会评吗？ +4 瞬息宇宙 2026-08-31 4/200 2026-09-01 14:58 by jiaoxg
[基金申请] 怎么看青基中了没有啊 +6 叶九微 2026-08-26 6/300 2026-08-31 23:54 by yudaoqian88
[基金申请] 国社科又开始会评了，不知道这次命运如何 +7 雨打竹帘 2026-08-30 11/550 2026-08-31 23:16 by hittle2008
[基金申请] 基金未中，这种答复是模板吗？ +6 zhaosm1982 2026-08-27 7/350 2026-08-31 21:18 by qdxxmc
[基金申请] 哪位高人中了，把查询到的截图贴出来让我看看，让我长长见识 +6 yuleib84 2026-08-26 7/350 2026-08-31 19:46 by 鱼翔浅底1
[基金申请] 能否申诉？ +7 echo8914667 2026-08-30 8/400 2026-08-31 17:00 by yihongxu
[基金申请] 29号明天会评吗 +4 笨笨唐 2026-08-28 4/200 2026-08-31 09:30 by huixian257
[基金申请] 为什么到现在没收到通知？ +5 tannykie 2026-08-29 5/250 2026-08-30 21:05 by purplejack
[基金申请] 我就是申请一个面上项目而已，这评审意见是按照杰青的条件评的吧？ +6 gouxfjh 2026-08-28 11/550 2026-08-30 07:57 by gouxfjh
[基金申请] 国自然评审意见 +13 wangmingqi 2026-08-28 19/950 2026-08-29 10:22 by Poppy1104
[基金申请] 2026年叶企孙基金 +4 bud_bud 2026-08-27 7/350 2026-08-29 07:23 by foolishmani
[基金申请] 基金系统什么内容也没有 30+4 winsaint 2026-08-27 9/450 2026-08-28 11:06 by maolC
[基金申请] 怎么查啊 +6 huang1991js 2026-08-26 6/300 2026-08-28 08:42 by winsaint
[基金申请] 我不理解！ +15 Edward_pc 2026-08-26 23/1150 2026-08-26 20:34 by zzuzxg
[基金申请] 出来了 +9 trojank 2026-08-26 9/450 2026-08-26 14:25 by 宝贝虫子
[基金申请] 国合里面能看到了 +7 一怀馨秋 2026-08-26 7/350 2026-08-26 11:23 by zhaosm1982
[基金申请] 系统进不去 +4 yanglien 2026-08-26 5/250 2026-08-26 11:10 by wenfengw83
[基金申请] 国合可查了 +3 paperzjh 2026-08-26 3/150 2026-08-26 10:41 by LemmonTr
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭