10楼: Originally posted by zhlf1989513 at 2013-04-20 09:16:23
重新看了下你的体系，你的引物量是不是用得太少了，我们12.5ul的体系引物都是0.5ul。。。你的TM值多高呢？可不可以把退火温度提高点同时引物量多点呢？...

11楼: Originally posted by xurong1127 at 2013-04-22 08:52:24
我的引物浓度时25um/L哦,我前天把引物量加到了0.5ul,变成了涂抹带,退火温度 ,我自己做了温度梯度的在59度左右,引物单子上是: F:Tm(50mMNa) 57.8  下游: Tm(50mMNa):51.1  想问下你以前出现过PCR 做不出来的现象吗? ...

12楼: Originally posted by zhlf1989513 at 2013-04-22 09:40:41
你这对引物的Tm值怎么相差这么大呢？一般不要超过5度呢。。。总的来说如果引物特异性不好的话 降落应该挺管用的 万一不行你真的可以用重叠延伸试一下吧 我以前P较长片段的时候用过重叠延伸PCR。。。...

14楼: Originally posted by wangqi1107 at 2013-04-22 16:29:52
把你图片发过来看看，用二次PCR试试。你的引物合成单是什么？引物稀释浓度是多少？哪个公司的酶？dNTP浓度是多少？发信息具体点好分析问题！！！