| 查看: 1436 | 回复: 17 | ||
| 本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
xurong1127新虫 (初入文坛)
|
[求助]
PCR问题
|
|
|
各位大侠,谁能帮帮我啊!我构建MMP7质粒,克隆全长.上游引物:MMP7-F: 5’ CGGGATCCATC AAC CAT AGG TCC AAG AAC 3’ 酶: BamHI MMP7-R: 5’CGGAATTCTTT CTT TCT TGA ATT ACT TCT C 3’ 酶: ECOR I 普通PCR根本做不出,模板换了好几种,用Touchdown可以做出淡淡的调带 我的反应条件是:95℃ 3分钟 ,95℃ 45s 60-50℃逐渐降温 30s ,72℃ 1分钟,然后50℃ 30个循环, 72℃ 10分钟 ,谁能帮我想想还有别的好办法吗? 我的引物也换过一次,之前的引物也是各种方法都试了!就是做出不去 我的反应体系 25微升 水 16.85 ,dNTP 4, 10xbf 2.5, 引物 1 0.2, 引物2 0.2 ,Taq酶 0.25 CDNA 1 , [ Last edited by xurong1127 on 2013-4-18 at 16:40 ] |
回复此楼» 本帖已获得的红花（最新10朵）
xurong1127» 猜你喜欢
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有150人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
-
氢氧化钾活化操作
已经有18人回复
-
散金
已经有68人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
wangqi1107
银虫 (小有名气)
- 应助: 57 (初中生)
- 金币: 194.3
- 红花: 2
- 帖子: 122
- 在线: 121.7小时
- 虫号: 995882
- 注册: 2010-04-13
- 专业: 生物大分子结构与功能
14楼2013-04-22 16:29:52
zhlf1989513
金虫 (小有名气)
- MolEPI: 2
- 应助: 62 (初中生)
- 金币: 1806.2
- 红花: 2
- 帖子: 252
- 在线: 257.5小时
- 虫号: 1794702
- 注册: 2012-05-04
- 性别: GG
- 专业: 系统生物学
2楼2013-04-18 18:07:21
【答案】应助回帖
★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+3, MolEPI+1, 鼓励积极发帖帮助解答问题。 2013-04-18 20:12:07
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+3, MolEPI+1, 鼓励积极发帖帮助解答问题。 2013-04-18 20:12:07
|
问题都问不清楚 1.你的模板是什么啊？ “模板换了好几种”这也叫线索啊？ 2.你的目的是什么啊？ “我构建MMP7质粒,克隆全长”，这也叫目的啊，MMP7是什么啊，克隆全长？那你直接转化质粒，提质粒，做个single digest不就是全长了。 3.实验情况是什么啊？ “淡淡的条带”，你以为淡淡的忧伤啊。有条带你丫难道还P不出来了？（是条带，不是调） 4.你要P的目的条带全长基因多少啊？ “95℃ 3分钟 ,95℃ 45s 60-50℃逐渐降温 30s ,72℃ 1分钟,然后50℃ 30个循环, 72℃ 10分钟 ”你确定45s，30s，1min分分钟能搞出下一代吗 5.反应30个循环，引物你加0.2ul？你看是不是太抠了点 |
3楼2013-04-18 18:14:45
xurong1127
新虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 48.3
- 红花: 1
- 帖子: 28
- 在线: 5.3小时
- 虫号: 2400682
- 注册: 2013-04-04
- 性别: MM
- 专业: 子宫内膜异位症与子宫腺肌
4楼2013-04-19 08:58:29
