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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 材料区 » 生物材料 » 生物效应评价 » 细胞生长在凝胶后，梯度酒精脱水时凝胶的固定问题
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liuquan0814

金虫 (小有名气)

[求助] 细胞生长在凝胶后，梯度酒精脱水时凝胶的固定问题

细胞（成纤维细胞）在水凝胶（高约为1mm）上面生长两天后，采用戊二醛固定，隔夜处理后，PBS清洗三次。24孔板中的凝胶采用梯度酒精进行脱水处理，至于扫描电镜下拍照，但是几个样品都看不到细胞。觉得会不会是因为梯度脱水时，凝胶收缩，其结构发生了较大的变化，使得细胞脱落？梯度酒精处理的时候要不要将水凝胶固定？怎么固定呢？求大虾支招
PS：没有采用梯度酒精处理，而是采用冷冻干燥处理的凝胶，一样在扫描电镜下看不到细胞。
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广交益友
1楼 2013-04-17 16:56:05
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emanon_88

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
黄酮: 金币+1, 谢谢回帖交流 2013-04-17 21:10:08
liuquan0814(红舟流星代发): 金币+4, 代扣代发金币 2013-08-31 12:16:22
固定生物材料上的细胞时戊二醛的浓度最好用3%的，浓度过高会引起水凝胶的交联反应；此外材料浸泡在戊二醛溶液中一般只要半小时就可以进行乙醇的梯度脱水处理了；虽然脱水后材料结构会变化，引起细胞变形，但细胞脱落的情况比较少。。。。。。。。。。。此外，个人认为水凝胶材料比较透明，且吸水性强，脱水后会使细胞生长情况失真，可以对细胞染色后直接在荧光显微镜下拍照（类似免疫荧光）
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2楼2013-04-17 20:31:35
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yifeng1206

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
fool_proof: 金币+1, 欢迎常来生物材料版应助交流 2013-04-18 08:14:41
liuquan0814(红舟流星代发): 金币+2, 代扣代发金币 2013-08-31 12:16:27
我也跟楼上一样的观点，细胞可以用4%PFA固定，然后进行荧光染色就可以观察细胞了
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3楼2013-04-17 22:11:38
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晚香玉

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
fool_proof: 金币+1, 欢迎常来生物材料版应助交流 2013-04-18 08:14:59
liuquan0814(红舟流星代发): 金币+2, 代扣代发金币 2013-08-31 12:16:33
首先要确定的是你的细胞种上去了没有
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4楼2013-04-17 23:42:43
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liuquan0814

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 晚香玉 at 2013-04-17 23:42:43
首先要确定的是你的细胞种上去了没有

确定种上去了，染色后在倒置显微镜下面能够看到细胞核，还有部分细胞的触角
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广交益友
5楼2013-04-18 08:51:45
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liuquan0814

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by emanon_88 at 2013-04-17 20:31:35
固定生物材料上的细胞时戊二醛的浓度最好用3%的，浓度过高会引起水凝胶的交联反应；此外材料浸泡在戊二醛溶液中一般只要半小时就可以进行乙醇的梯度脱水处理了；虽然脱水后材料结构会变化，引起细胞变形，但细胞脱落 ...

我用固定后，做过染色，倒置荧光显微镜下也能看到生长的细胞。谢谢了
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广交益友
6楼2013-04-18 09:18:12
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黄昏过客

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
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fool_proof: 金币+1, 欢迎常来生物材料版应助交流 2013-04-18 12:53:10
liuquan0814(红舟流星代发): 金币+2, 代扣代发金币 2013-08-31 12:16:39
你的PS有问题吧 我们用的冻干就可以看到细胞的   支架材料固定后PBS清洗完冻干直接去看扫描电镜可以看到的   当然  我觉得荧光看形态效果好些  彩图还是比黑白好看些
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从小与世抗争，无奈轮回难过
7楼2013-04-18 11:19:01
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Jackingxue

新虫 (初入文坛)
你好，我也是做水凝胶的。但是，我发现水凝胶好像不能进行包蜡块，进行HE染色。因为在脱水过程中，水凝胶就没了，不知道你有什么好方法吗
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8楼2013-12-17 11:41:06
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zp519

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by Jackingxue at 2013-12-17 11:41:06
你好，我也是做水凝胶的。但是，我发现水凝胶好像不能进行包蜡块，进行HE染色。因为在脱水过程中，水凝胶就没了，不知道你有什么好方法吗

水凝胶能用 脱水处理吗？
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9楼2022-11-03 11:05:18
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