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liuquan0814金虫 (小有名气)
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[求助]
细胞生长在凝胶后，梯度酒精脱水时凝胶的固定问题
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细胞（成纤维细胞）在水凝胶（高约为1mm）上面生长两天后，采用戊二醛固定，隔夜处理后，PBS清洗三次。24孔板中的凝胶采用梯度酒精进行脱水处理，至于扫描电镜下拍照，但是几个样品都看不到细胞。觉得会不会是因为梯度脱水时，凝胶收缩，其结构发生了较大的变化，使得细胞脱落？梯度酒精处理的时候要不要将水凝胶固定？怎么固定呢？求大虾支招 PS：没有采用梯度酒精处理，而是采用冷冻干燥处理的凝胶，一样在扫描电镜下看不到细胞。 |
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yifeng1206
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3楼2013-04-17 22:11:38
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
黄酮: 金币+1, 谢谢回帖交流 2013-04-17 21:10:08
liuquan0814(红舟流星代发): 金币+4, 代扣代发金币 2013-08-31 12:16:22
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黄酮: 金币+1, 谢谢回帖交流 2013-04-17 21:10:08
liuquan0814(红舟流星代发): 金币+4, 代扣代发金币 2013-08-31 12:16:22
| 固定生物材料上的细胞时戊二醛的浓度最好用3%的，浓度过高会引起水凝胶的交联反应；此外材料浸泡在戊二醛溶液中一般只要半小时就可以进行乙醇的梯度脱水处理了；虽然脱水后材料结构会变化，引起细胞变形，但细胞脱落的情况比较少。。。。。。。。。。。此外，个人认为水凝胶材料比较透明，且吸水性强，脱水后会使细胞生长情况失真，可以对细胞染色后直接在荧光显微镜下拍照（类似免疫荧光） |
2楼2013-04-17 20:31:35
晚香玉
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4楼2013-04-17 23:42:43
liuquan0814
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5楼2013-04-18 08:51:45