| 查看: 4136 | 回复: 27 | ||||||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||||||
[交流]
胶原蛋白的提取，我综合的一个方案，麻烦大家看看，我有些疑问额。 已有6人参与
|
||||||
|
胶原蛋白的提取 实验原料：猪皮，氯仿，乙醇，乙酸，0.05mol/L Tris-HCl缓冲液，NaCl，NaOH，胃蛋白酶，蒸馏水。 实验器材：搅拌机，低温离心机，控温磁力搅拌器，电子天平，透析设备，PH试纸，烧杯，玻璃棒，小刀，研钵。 实验需配药品：A:氯仿/乙醇（2:1）约需400ml， B:0.5mol/L乙酸约3000ml， C:6mol/L NaOH溶液约40ml, D:质量分数0.1％、0.01％的乙酸（透析用）， E:含4.5mol/LNaCl的0.05mol/LTris-HCl缓冲液约需200ml。 实验步骤： 1,猪皮的前处理： （1）称取猪皮50g，用氯仿/乙醇（2:1，A）溶液对其进行脱脂后切除皮下脂肪，去毛并细切； （2）将组织小块用乙醇和蒸馏水洗涤多次； （3）将洗涤后的组织放入搅拌机中搅拌成糊状，用含4.5mol/L NaCl的0.05mol/L Tris-HCl缓冲液（pH 7.5，E）充分洗涤（2h）以去除脂质及血清等成分，低温离心（8000r/min，30min，4℃）取沉淀。 2,提取胶原蛋白： （1）进行前处理后，在沉淀中加入500ml含胃蛋白酶250mg的0.5mol/L冰醋酸（B），搅拌并维持在4℃，提取48h； （2） 高速冷冻离心机离心（4000r/min）吸取上清液。在上清液中加入NaCl至4.4mol/L（NaCl2.2mol）搅拌过夜； （3）低温离心，将沉淀溶于0.5mol/L冰醋酸中，再逐级用2.4mol/L（NaCl1.2mol，以500ml冰醋酸计），1.7mol/L（NaCl0.85mol）及1.0mol/L（NaCl0.5mol）的NaCl反复盐析、酸溶。最后得到的上清液即为胶原粗提液。 3,胶原蛋白提纯: （1）在粗提胶原蛋白溶液缓慢加入6 mol/L NaOH溶液（C）调节pH值到7，冷冻离心除掉沉淀物，在剩余的溶液中加入氯化钠固体研细粉末，缓慢搅拌，4 ℃静置过夜保存； （2）离心取沉淀，用稀醋酸再次溶解，将溶解液装入透析袋中，用质量分数分别为0.1%、0.01%的乙酸溶液（D）透析1 d，再用蒸馏水透析3d，每天换透析液两次，最后得到的是纯度较高的胶原蛋白水溶液； （3）将纯化的胶原蛋白水溶液采用低温冷冻干燥法制备成纯胶原蛋白样品，备用。 |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 研究生涯专用 | 关于学术 | 研究僧 |
» 猜你喜欢
这些Scopus收录的英文国际期刊正在征稿（快速审稿）2026年底前免APC！
已经有12人回复
-
做mRNA体外加帽，Cap0转Cap1效率不稳？分享一款2´-O甲基转移酶实测感受
已经有0人回复
-
生物力学与组织工程学论文润色/翻译怎么收费?
已经有240人回复
-
美国南加大(USC)药学院Prof. Yong (Tiger) Zhang课题组诚聘博士后
已经有4人回复
-
反应产物总提不上量？聊聊无机焦磷酸酶在核酸合成里的实用价值
已经有0人回复
-
【经验分享】体外转录踩坑无数，挖到一款好用的国产 T7 RNA 聚合酶
已经有0人回复
-
体外转录 / PCR 总提不上产量？终于找到稳定好用的无机焦磷酸酶
已经有5人回复
-
[会议预告]2026生物医药产业发展大会
已经有0人回复
-
【产品测评分享】体外转录产量不理想、dsRNA 副产物高？T7 RNA 聚合酶实测体验
已经有4人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 麻烦大家看看几a几b
已经有130人回复
- 麻烦大家給看看一个概念
已经有4人回复
- 帮我看下我的蛋白胶~谢谢 marker 跑不好
已经有5人回复
- 请教一个关于技术逐级放大的问题。
已经有11人回复
- 晒意见，请大家提建议。没有上会。
已经有85人回复
- 我有一个关于无菌操作的疑问！
已经有20人回复
- 胶原蛋白的提取前处理，除脂
已经有8人回复
- 牛腱胶原蛋白的提取问题
已经有8人回复
- 【求助】胶原蛋白的提取
已经有22人回复
fool_proof
铁杆木虫 (正式写手)
- 应助: 97 (初中生)
- 贵宾: 0.298
- 金币: 7081.6
- 散金: 533
- 红花: 3
- 帖子: 870
- 在线: 319小时
- 虫号: 1066876
- 注册: 2010-07-30
- 性别: GG
- 专业: 生物医用高分子材料
5楼2013-04-17 12:58:43
3楼2013-04-16 23:10:59
4楼2013-04-17 05:36:53
6楼2013-04-17 15:29:10
