| 查看: 3675 | 回复: 27 | ||||||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||||||
[交流]
胶原蛋白的提取，我综合的一个方案，麻烦大家看看，我有些疑问额。 已有6人参与
|
||||||
|
胶原蛋白的提取 实验原料：猪皮，氯仿，乙醇，乙酸，0.05mol/L Tris-HCl缓冲液，NaCl，NaOH，胃蛋白酶，蒸馏水。 实验器材：搅拌机，低温离心机，控温磁力搅拌器，电子天平，透析设备，PH试纸，烧杯，玻璃棒，小刀，研钵。 实验需配药品：A:氯仿/乙醇（2:1）约需400ml， B:0.5mol/L乙酸约3000ml， C:6mol/L NaOH溶液约40ml, D:质量分数0.1％、0.01％的乙酸（透析用）， E:含4.5mol/LNaCl的0.05mol/LTris-HCl缓冲液约需200ml。 实验步骤： 1,猪皮的前处理： （1）称取猪皮50g，用氯仿/乙醇（2:1，A）溶液对其进行脱脂后切除皮下脂肪，去毛并细切； （2）将组织小块用乙醇和蒸馏水洗涤多次； （3）将洗涤后的组织放入搅拌机中搅拌成糊状，用含4.5mol/L NaCl的0.05mol/L Tris-HCl缓冲液（pH 7.5，E）充分洗涤（2h）以去除脂质及血清等成分，低温离心（8000r/min，30min，4℃）取沉淀。 2,提取胶原蛋白： （1）进行前处理后，在沉淀中加入500ml含胃蛋白酶250mg的0.5mol/L冰醋酸（B），搅拌并维持在4℃，提取48h； （2） 高速冷冻离心机离心（4000r/min）吸取上清液。在上清液中加入NaCl至4.4mol/L（NaCl2.2mol）搅拌过夜； （3）低温离心，将沉淀溶于0.5mol/L冰醋酸中，再逐级用2.4mol/L（NaCl1.2mol，以500ml冰醋酸计），1.7mol/L（NaCl0.85mol）及1.0mol/L（NaCl0.5mol）的NaCl反复盐析、酸溶。最后得到的上清液即为胶原粗提液。 3,胶原蛋白提纯: （1）在粗提胶原蛋白溶液缓慢加入6 mol/L NaOH溶液（C）调节pH值到7，冷冻离心除掉沉淀物，在剩余的溶液中加入氯化钠固体研细粉末，缓慢搅拌，4 ℃静置过夜保存； （2）离心取沉淀，用稀醋酸再次溶解，将溶解液装入透析袋中，用质量分数分别为0.1%、0.01%的乙酸溶液（D）透析1 d，再用蒸馏水透析3d，每天换透析液两次，最后得到的是纯度较高的胶原蛋白水溶液； （3）将纯化的胶原蛋白水溶液采用低温冷冻干燥法制备成纯胶原蛋白样品，备用。 |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 研究生涯专用 | 关于学术 | 研究僧 |
» 猜你喜欢
大连医科大学肿瘤干细胞研究院 招收生物化学与分子生物学专业硕士研究生
已经有0人回复
-
招考研调剂生
已经有0人回复
-
生物物理、生物化学与分子生物学论文润色/翻译怎么收费?
已经有249人回复
-
生物学308（一志愿华东师大）求调剂
已经有2人回复
-
中山大学孙逸仙纪念医院招收2026年考研调剂生
已经有0人回复
-
中山大学孙逸仙纪念医院招收2026年考研调剂生
已经有0人回复
-
中山大学孙逸仙纪念医院招收2026年考研调剂生
已经有0人回复
-
提供奖学金 ，西交利物浦大学刘波课题组招传感器方向博士研究生
已经有0人回复
-
提供奖学金 ，西交利物浦大学刘波课题组招传感器方向博士研究生
已经有0人回复
-
340求调剂
已经有2人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 麻烦大家看看几a几b
已经有130人回复
- 麻烦大家給看看一个概念
已经有4人回复
- 帮我看下我的蛋白胶~谢谢 marker 跑不好
已经有5人回复
- 请教一个关于技术逐级放大的问题。
已经有11人回复
- 晒意见，请大家提建议。没有上会。
已经有85人回复
- 我有一个关于无菌操作的疑问！
已经有20人回复
- 胶原蛋白的提取前处理，除脂
已经有8人回复
- 牛腱胶原蛋白的提取问题
已经有8人回复
- 【求助】胶原蛋白的提取
已经有22人回复
fool_proof
铁杆木虫 (正式写手)
- 应助: 97 (初中生)
- 贵宾: 0.298
- 金币: 7081.6
- 散金: 533
- 红花: 3
- 帖子: 870
- 在线: 319小时
- 虫号: 1066876
- 注册: 2010-07-30
- 性别: GG
- 专业: 生物医用高分子材料
5楼2013-04-17 12:58:43
3楼2013-04-16 23:10:59
4楼2013-04-17 05:36:53
6楼2013-04-17 15:29:10
130