| 查看: 3683 | 回复: 27 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[交流]
胶原蛋白的提取，我综合的一个方案，麻烦大家看看，我有些疑问额。 已有6人参与
|
|||
|
胶原蛋白的提取 实验原料：猪皮，氯仿，乙醇，乙酸，0.05mol/L Tris-HCl缓冲液，NaCl，NaOH，胃蛋白酶，蒸馏水。 实验器材：搅拌机，低温离心机，控温磁力搅拌器，电子天平，透析设备，PH试纸，烧杯，玻璃棒，小刀，研钵。 实验需配药品：A:氯仿/乙醇（2:1）约需400ml， B:0.5mol/L乙酸约3000ml， C:6mol/L NaOH溶液约40ml, D:质量分数0.1％、0.01％的乙酸（透析用）， E:含4.5mol/LNaCl的0.05mol/LTris-HCl缓冲液约需200ml。 实验步骤： 1,猪皮的前处理： （1）称取猪皮50g，用氯仿/乙醇（2:1，A）溶液对其进行脱脂后切除皮下脂肪，去毛并细切； （2）将组织小块用乙醇和蒸馏水洗涤多次； （3）将洗涤后的组织放入搅拌机中搅拌成糊状，用含4.5mol/L NaCl的0.05mol/L Tris-HCl缓冲液（pH 7.5，E）充分洗涤（2h）以去除脂质及血清等成分，低温离心（8000r/min，30min，4℃）取沉淀。 2,提取胶原蛋白： （1）进行前处理后，在沉淀中加入500ml含胃蛋白酶250mg的0.5mol/L冰醋酸（B），搅拌并维持在4℃，提取48h； （2） 高速冷冻离心机离心（4000r/min）吸取上清液。在上清液中加入NaCl至4.4mol/L（NaCl2.2mol）搅拌过夜； （3）低温离心，将沉淀溶于0.5mol/L冰醋酸中，再逐级用2.4mol/L（NaCl1.2mol，以500ml冰醋酸计），1.7mol/L（NaCl0.85mol）及1.0mol/L（NaCl0.5mol）的NaCl反复盐析、酸溶。最后得到的上清液即为胶原粗提液。 3,胶原蛋白提纯: （1）在粗提胶原蛋白溶液缓慢加入6 mol/L NaOH溶液（C）调节pH值到7，冷冻离心除掉沉淀物，在剩余的溶液中加入氯化钠固体研细粉末，缓慢搅拌，4 ℃静置过夜保存； （2）离心取沉淀，用稀醋酸再次溶解，将溶解液装入透析袋中，用质量分数分别为0.1%、0.01%的乙酸溶液（D）透析1 d，再用蒸馏水透析3d，每天换透析液两次，最后得到的是纯度较高的胶原蛋白水溶液； （3）将纯化的胶原蛋白水溶液采用低温冷冻干燥法制备成纯胶原蛋白样品，备用。 |
回复此楼» 猜你喜欢
中山大学孙逸仙纪念医院招收2026年考研调剂生
已经有0人回复
-
中山大学孙逸仙纪念医院招收2026年考研调剂生
已经有1人回复
-
生物力学与组织工程学论文润色/翻译怎么收费?
已经有183人回复
-
中山大学孙逸仙纪念医院招收2026年考研调剂生
已经有0人回复
-
提供奖学金 ，西交利物浦大学刘波课题组招传感器方向博士研究生
已经有0人回复
-
提供奖学金 ，西交利物浦大学刘波课题组招传感器方向博士研究生
已经有0人回复
-
340求调剂
已经有4人回复
-
大连工业大学 生物质能源与材料专业招收调剂生，有兴趣加联系：15732893021
已经有0人回复
-
生物学308分求调剂（一志愿华东师大）
已经有2人回复
-
求考研调剂推荐
已经有1人回复
-
大连工业大学 生物质能源与材料专业招收调剂生，有兴趣加联系：15732893021
已经有0人回复
15楼2013-05-18 23:24:48
3楼2013-04-16 23:10:59
4楼2013-04-17 05:36:53
fool_proof
铁杆木虫 (正式写手)
- 应助: 97 (初中生)
- 贵宾: 0.298
- 金币: 7081.6
- 散金: 533
- 红花: 3
- 帖子: 870
- 在线: 319小时
- 虫号: 1066876
- 注册: 2010-07-30
- 性别: GG
- 专业: 生物医用高分子材料
5楼2013-04-17 12:58:43
