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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 我的绿色荧光蛋白应该在细胞膜上有 怎么整张图片都是全都是绿色的呢
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necilyx

金虫 (正式写手)

[求助] 我的绿色荧光蛋白应该在细胞膜上有 怎么整张图片都是全都是绿色的呢

我的目的蛋白在细胞膜上~~问问免疫荧光染色之后为什么全都是绿色的~~看看大家提提啥意见，怎么改进啊？
我用2%甲醛固定过，没用通透液处理过，与这个有关吗？但是核能染色~应该细胞膜通透性ok吧？不太知道，求解~

图片1.jpg



这是细胞核的.jpg
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聪明才智要为意外做准备~~
1楼 2013-04-16 12:38:11
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auroraA

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+2, 谢谢分享经验 2013-04-18 08:16:01
necilyx: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-04-22 08:15:52
你没有permeablize细胞,如果你的target蛋白不在细胞膜上,就是因为抗体残留在细胞膜上,没洗干净.从没有细胞的地方看到,背景也很高,基本确定是洗的不好或曝光太强
DNA如果用DAPI染,染出来不奇怪,因为DAPI是cell permeable的,就算活细胞也能进去.可是抗体就不行了,必须permeablize
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4楼2013-04-17 08:53:09
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sl35537417

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+2, 鼓励发帖交流 2013-04-17 08:27:41
necilyx: 金币+4, ★★★很有帮助 2013-04-22 08:16:19
细胞是圆形 立体结构  你看到的只是一个平面   全是绿的
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2楼2013-04-16 16:45:44
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晨萍之水

银虫 (正式写手)
★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+1, 应助指数-1, 谢谢参与，这种回答不能作为应助 2013-04-17 08:27:29
同意二楼的见解，去试一下
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~勇敢和执着也是一种霸气~
3楼2013-04-16 17:03:40
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necilyx

金虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by auroraA at 2013-04-17 08:53:09
你没有permeablize细胞,如果你的target蛋白不在细胞膜上,就是因为抗体残留在细胞膜上,没洗干净.从没有细胞的地方看到,背景也很高,基本确定是洗的不好或曝光太强
DNA如果用DAPI染,染出来不奇怪,因为DAPI是cell perm ...

非常感谢~~~
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聪明才智要为意外做准备~~
5楼2013-04-22 08:16:08
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