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necilyx

金虫 (正式写手)

[求助] 我的绿色荧光蛋白应该在细胞膜上有 怎么整张图片都是全都是绿色的呢

我的目的蛋白在细胞膜上~~问问免疫荧光染色之后为什么全都是绿色的~~看看大家提提啥意见,怎么改进啊?
我用2%甲醛固定过,没用通透液处理过,与这个有关吗?但是核能染色~应该细胞膜通透性ok吧?不太知道,求解~

图片1.jpg



这是细胞核的.jpg
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聪明才智要为意外做准备~~
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sl35537417

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
wizardfan: 金币+2, 鼓励发帖交流 2013-04-17 08:27:41
necilyx: 金币+4, ★★★很有帮助 2013-04-22 08:16:19
细胞是圆形 立体结构  你看到的只是一个平面   全是绿的
2楼2013-04-16 16:45:44
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晨萍之水

银虫 (正式写手)

★
感谢参与,应助指数 +1
wizardfan: 金币+1, 应助指数-1, 谢谢参与,这种回答不能作为应助 2013-04-17 08:27:29
同意二楼的见解,去试一下
~勇敢和执着也是一种霸气~
3楼2013-04-16 17:03:40
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auroraA

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
wizardfan: 金币+2, 谢谢分享经验 2013-04-18 08:16:01
necilyx: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-04-22 08:15:52
你没有permeablize细胞,如果你的target蛋白不在细胞膜上,就是因为抗体残留在细胞膜上,没洗干净.从没有细胞的地方看到,背景也很高,基本确定是洗的不好或曝光太强
DNA如果用DAPI染,染出来不奇怪,因为DAPI是cell permeable的,就算活细胞也能进去.可是抗体就不行了,必须permeablize
4楼2013-04-17 08:53:09
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necilyx

金虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by auroraA at 2013-04-17 08:53:09
你没有permeablize细胞,如果你的target蛋白不在细胞膜上,就是因为抗体残留在细胞膜上,没洗干净.从没有细胞的地方看到,背景也很高,基本确定是洗的不好或曝光太强
DNA如果用DAPI染,染出来不奇怪,因为DAPI是cell perm ...

非常感谢~~~
聪明才智要为意外做准备~~
5楼2013-04-22 08:16:08
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necilyx

金虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by sl35537417 at 2013-04-16 16:45:44
细胞是圆形 立体结构  你看到的只是一个平面   全是绿的

谢谢~~
聪明才智要为意外做准备~~
6楼2013-04-22 08:16:26
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necilyx

金虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 晨萍之水 at 2013-04-16 17:03:40
同意二楼的见解,去试一下

好的,谢谢啦
聪明才智要为意外做准备~~
7楼2013-04-22 08:16:48
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