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绝路书生

铜虫 (小有名气)

[求助] 请大神分析此离子交换图谱

我用的DEAE sepharose FF分离纯化我的蛋白,CV=20ml,核酸蛋白检测仪,恒流泵1ml/min,平衡液用20mM pH7.0 Tris-Hcl缓冲液。 图片中标出了几个峰。
1:上样后平衡液洗脱去没有吸附上的杂蛋白峰。
2: 0.1M 氯化钠洗脱峰。
3: 0.15M 氯化钠洗脱峰
4: 0.2M氯化钠洗脱峰。
5: 0.25M氯化钠洗脱峰。
6: 0.3M氯化钠洗脱峰。
7: 2M氯化钠洗脱峰。

问题:图中用小浓度的(0.1-0.2M)氯化钠洗脱时峰形只有上没有下。而0.25M氯化钠又恢复了良好的峰形,2M氯化钠洗脱OD变回了0,不知道有没有人遇到这个问题。

层析图谱1加号码.jpg
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zhenwuhuang

至尊木虫 (文学泰斗)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
太模糊了,虫子们看得好眼花。顶一下
2楼2013-04-14 10:33:14
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xyz7819227

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
1,2两个峰分离的比较好,3、4、5、6、7明显没有分开,可能是洗脱的时间不够长,或者是离子柱已经不具备把它们分离开的能力了。建议延长3、4、5、6、7的洗脱时间,或者一次性把3-7的组分全洗下来,然后用另外的柱子对其进行分离纯化
海纳百川,有容乃大
3楼2013-04-15 16:47:55
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豆豆菜虫

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你的柱子的参数是多少???有时候 柱子的内径与高会影响的~~
很多事,不是我想,就能做到的。很多东西,不是我要,就能得到的。
4楼2013-04-15 19:28:11
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