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wmhye

金虫 (小有名气)

[求助] 转化后细菌,酶切验证都不出现条带如图所示,这是什么原因,求大神指点?

转化后细菌菌挑单菌落培养,提质粒跑电泳条带都正确,但是酶切验证都不出现条带如图所示,这是什么原因,求大神指点?

质粒电泳



酶切电泳
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爱海洋,更爱生物
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wmhye

金虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
8楼: Originally posted by aeo22 at 2013-04-15 01:25:24
哇塞,酶切切烂了,要是我就直接扔了,应该假的
要么你用酶多了?
要么你切久了?
菌落PCR的话也有假的啊,你用牙签或者枪头在培养基上点一下菌,前一天涂板铺在培养基表面的插入片段就很可能带进去你PCR反应体系 ...

哦!这样啊,我用酶和质粒分别是1.5和7微升
爱海洋,更爱生物
10楼2013-04-15 21:42:20
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kx444555

至尊木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
先PCR自已的片段,看看有没有插入进去

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

星陈代谢
2楼2013-04-13 22:01:24
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留小保

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
wmhye: 金币+10, ★★★很有帮助, 绝对是同一批的,酶切了3个小时,那下次酶切把时间减少些看看,谢谢了 2013-04-14 21:32:17
看第二张图像是切的时间太长了,验证的时候一般切1-2个小时就足够了,时间久了就切碎了会出现模糊条带,还有可能就是你酶切验证的跟转化的是一批吗?
人生若只如初见 何事秋风悲画扇
3楼2013-04-14 00:26:08
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
确定酶、buffer什么的没有问题吗?

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

4楼2013-04-14 00:54:10
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