应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 转化后细菌，酶切验证都不出现条带如图所示，这是什么原因，求大神指点？
121/2返回列表12下一页
查看: 1753  |  回复: 11
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

wmhye

金虫 (小有名气)

[求助] 转化后细菌，酶切验证都不出现条带如图所示，这是什么原因，求大神指点？

转化后细菌菌挑单菌落培养，提质粒跑电泳条带都正确，但是酶切验证都不出现条带如图所示，这是什么原因，求大神指点？

质粒电泳



酶切电泳
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
爱海洋，更爱生物
1楼 2013-04-13 21:19:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kx444555

至尊木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
先PCR自已的片段，看看有没有插入进去
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

wmhye
星陈代谢
2楼2013-04-13 22:01:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

留小保

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wmhye: 金币+10, ★★★很有帮助, 绝对是同一批的，酶切了3个小时，那下次酶切把时间减少些看看，谢谢了 2013-04-14 21:32:17
看第二张图像是切的时间太长了，验证的时候一般切1-2个小时就足够了，时间久了就切碎了会出现模糊条带，还有可能就是你酶切验证的跟转化的是一批吗？
赞一下 回复此楼
人生若只如初见 何事秋风悲画扇
3楼2013-04-14 00:26:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
确定酶、buffer什么的没有问题吗？
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

wmhye
4楼2013-04-14 00:54:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wmhye

金虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-04-14 00:54:10
确定酶、buffer什么的没有问题吗？

我特定验证了一下酶，没有问题的。。。谢谢了
赞一下 回复此楼
爱海洋，更爱生物
5楼2013-04-14 21:33:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wmhye

金虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by kx444555 at 2013-04-13 22:01:24
先PCR自已的片段，看看有没有插入进去

我是先PCR验证的，然后再是提质粒酶切的。。。谢谢
赞一下 回复此楼
爱海洋，更爱生物
6楼2013-04-14 21:34:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yiloutingyu

铜虫 (小有名气)
你能确定你用的酶就能切开你的东西吗？ 还有就是如果你的片段上有你用的酶的酶切位点的话切出来的片段也不一样，意思是说酶会把你的片段也切开。所以建议你先查查你的序列，看看有什么样的酶切位点。再找合适的酶切。
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

wmhye
7楼2013-04-14 21:53:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

aeo22

木虫 (正式写手)
哇塞，酶切切烂了，要是我就直接扔了，应该假的
要么你用酶多了？
要么你切久了？
菌落PCR的话也有假的啊，你用牙签或者枪头在培养基上点一下菌，前一天涂板铺在培养基表面的插入片段就很可能带进去你PCR反应体系里面咯
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

wmhye
8楼2013-04-15 01:25:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wmhye

金虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
7楼: Originally posted by yiloutingyu at 2013-04-14 21:53:20
你能确定你用的酶就能切开你的东西吗？ 还有就是如果你的片段上有你用的酶的酶切位点的话切出来的片段也不一样，意思是说酶会把你的片段也切开。所以建议你先查查你的序列，看看有什么样的酶切位点。再找合适的酶切 ...

谢谢了
回复此楼
爱海洋，更爱生物
9楼2013-04-15 21:36:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wmhye

金虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
8楼: Originally posted by aeo22 at 2013-04-15 01:25:24
哇塞，酶切切烂了，要是我就直接扔了，应该假的
要么你用酶多了？
要么你切久了？
菌落PCR的话也有假的啊，你用牙签或者枪头在培养基上点一下菌，前一天涂板铺在培养基表面的插入片段就很可能带进去你PCR反应体系 ...

哦！这样啊，我用酶和质粒分别是1.5和7微升
赞一下 回复此楼
爱海洋，更爱生物
10楼2013-04-15 21:42:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 wmhye 的主题更新
121/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 能否申诉？ +7 echo8914667 2026-08-30 8/400 2026-08-31 17:00 by yihongxu
[基金申请] 基金不中，共勉 +12 eulota 2026-08-26 12/600 2026-08-31 08:42 by ZJTJZ
[基金申请] 为什么到现在没收到通知？ +5 tannykie 2026-08-29 5/250 2026-08-30 21:05 by purplejack
[基金申请] 麻烦专家们看看评委们的意见（F口面上） +6 gdd2018 2026-08-28 11/550 2026-08-30 08:58 by 超级无敌华子
[基金申请] 我就是申请一个面上项目而已，这评审意见是按照杰青的条件评的吧？ +6 gouxfjh 2026-08-28 11/550 2026-08-30 07:57 by gouxfjh
[基金申请] 国自然评审意见 +13 wangmingqi 2026-08-28 19/950 2026-08-29 10:22 by Poppy1104
[基金申请] 2026年叶企孙基金 +4 bud_bud 2026-08-27 7/350 2026-08-29 07:23 by foolishmani
[基金申请] 为什么资助数各大高校都创新高，自己申请怎么就这么难 +12 Kittylucky 2026-08-27 13/650 2026-08-29 00:04 by superceng
[基金申请] 面上合作单位盖章 +5 ssyjh 2026-08-27 5/250 2026-08-27 20:50 by gdfollow
[基金申请] 基金未中，这种答复是模板吗？ +5 zhaosm1982 2026-08-27 6/300 2026-08-27 16:00 by lfy8008
[基金申请] 怎么看青基中了没有啊 +5 叶九微 2026-08-26 5/250 2026-08-27 10:35 by l_zh2008
[基金申请] 我不理解！ +15 Edward_pc 2026-08-26 23/1150 2026-08-26 20:34 by zzuzxg
[基金申请] 2026年8月25日国自然放榜前突然收到列入评审专家邮件，有关系吗？ +25 木水思豆 2026-08-25 28/1400 2026-08-26 14:53 by draco1987
[基金申请] 出来了 +9 trojank 2026-08-26 9/450 2026-08-26 14:25 by 宝贝虫子
[基金申请] 国合里面能看到了 +7 一怀馨秋 2026-08-26 7/350 2026-08-26 11:23 by zhaosm1982
[基金申请] 国际合作可查了，中了面上 (EPI+1)(金币+50) +18 Ldrop2023 2026-08-26 18/900 2026-08-26 11:15 by cmrandy
[基金申请] 项目信息和经费信息在系统里都可以看到了 +6 wittyboy 2026-08-26 14/700 2026-08-26 10:55 by wittyboy
[基金申请] 国合可查了 +3 paperzjh 2026-08-26 3/150 2026-08-26 10:41 by LemmonTr
[基金申请] 牛来！米来！面来！ +8 beefly 2026-08-26 8/400 2026-08-26 08:37 by xuzhipiao
[基金申请] 某些机构，以效率低为荣，以效率低作为存在感 +9 yuleib84 2026-08-25 10/500 2026-08-25 17:14 by alexon
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭