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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 转化后细菌，酶切验证都不出现条带如图所示，这是什么原因，求大神指点？
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wmhye

金虫 (小有名气)

[求助] 转化后细菌，酶切验证都不出现条带如图所示，这是什么原因，求大神指点？

转化后细菌菌挑单菌落培养，提质粒跑电泳条带都正确，但是酶切验证都不出现条带如图所示，这是什么原因，求大神指点？

质粒电泳



酶切电泳
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爱海洋，更爱生物
1楼 2013-04-13 21:19:58
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kx444555

至尊木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
先PCR自已的片段，看看有没有插入进去
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wmhye
星陈代谢
2楼2013-04-13 22:01:24
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留小保

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wmhye: 金币+10, ★★★很有帮助, 绝对是同一批的，酶切了3个小时，那下次酶切把时间减少些看看，谢谢了 2013-04-14 21:32:17
看第二张图像是切的时间太长了，验证的时候一般切1-2个小时就足够了，时间久了就切碎了会出现模糊条带，还有可能就是你酶切验证的跟转化的是一批吗？
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人生若只如初见 何事秋风悲画扇
3楼2013-04-14 00:26:08
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
确定酶、buffer什么的没有问题吗？
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wmhye
4楼2013-04-14 00:54:10
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wmhye

金虫 (小有名气)
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引用回帖:
4楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-04-14 00:54:10
确定酶、buffer什么的没有问题吗？

我特定验证了一下酶，没有问题的。。。谢谢了
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爱海洋，更爱生物
5楼2013-04-14 21:33:14
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wmhye

金虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by kx444555 at 2013-04-13 22:01:24
先PCR自已的片段，看看有没有插入进去

我是先PCR验证的，然后再是提质粒酶切的。。。谢谢
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爱海洋，更爱生物
6楼2013-04-14 21:34:04
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yiloutingyu

铜虫 (小有名气)
你能确定你用的酶就能切开你的东西吗？ 还有就是如果你的片段上有你用的酶的酶切位点的话切出来的片段也不一样，意思是说酶会把你的片段也切开。所以建议你先查查你的序列，看看有什么样的酶切位点。再找合适的酶切。
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wmhye
7楼2013-04-14 21:53:20
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aeo22

木虫 (正式写手)
哇塞，酶切切烂了，要是我就直接扔了，应该假的
要么你用酶多了？
要么你切久了？
菌落PCR的话也有假的啊，你用牙签或者枪头在培养基上点一下菌，前一天涂板铺在培养基表面的插入片段就很可能带进去你PCR反应体系里面咯
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wmhye
8楼2013-04-15 01:25:24
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wmhye

金虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
7楼: Originally posted by yiloutingyu at 2013-04-14 21:53:20
你能确定你用的酶就能切开你的东西吗？ 还有就是如果你的片段上有你用的酶的酶切位点的话切出来的片段也不一样，意思是说酶会把你的片段也切开。所以建议你先查查你的序列，看看有什么样的酶切位点。再找合适的酶切 ...

谢谢了
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爱海洋，更爱生物
9楼2013-04-15 21:36:12
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wmhye

金虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
8楼: Originally posted by aeo22 at 2013-04-15 01:25:24
哇塞，酶切切烂了，要是我就直接扔了，应该假的
要么你用酶多了？
要么你切久了？
菌落PCR的话也有假的啊，你用牙签或者枪头在培养基上点一下菌，前一天涂板铺在培养基表面的插入片段就很可能带进去你PCR反应体系 ...

哦！这样啊，我用酶和质粒分别是1.5和7微升
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爱海洋，更爱生物
10楼2013-04-15 21:42:20
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