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245087116

新虫 (初入文坛)

[求助] cDNA电泳图

第三个泳道是反转后的cDNA电泳图,marker是5000的,感觉反转后的条带比较小,大约在1000bp以下,这样的CDNA能用吗,能扩增出大片段吗,请高手帮忙分析原因,跪谢!!!

电泳图.jpg
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
10楼: Originally posted by 德国工兵铲 at 2013-04-17 16:56:53
我在一本书上看到,RNA是很影响PCR的,因为RNA与镁离子结合的能力非常强,进而影响酶活性。...

理论上是这样,但PCR所加的模板量本身很少,RNA也很少,体系里的镁离子应该是足量的。当然,如果样品中存在大量的RNA又另当别论。
11楼2013-04-18 00:34:04
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
245087116(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,鼓励应助,分子生物版块期待你的更多精彩。 2013-04-13 10:20:01
反转录后消化RNA模板了吗?电泳的上样量是多少?
2楼2013-04-13 05:40:14
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245087116

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-04-13 05:40:14
反转录后消化RNA模板了吗?电泳的上样量是多少?

消化RNA模板?啥意思,我反转之前消化的基因组DNA。此电泳上样量为3ul,麻烦您帮我分析一下,谢谢!!!
3楼2013-04-13 09:05:58
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 245087116 at 2013-04-13 09:05:58
消化RNA模板?啥意思,我反转之前消化的基因组DNA。此电泳上样量为3ul,麻烦您帮我分析一下,谢谢!!!...

你是说只合成了第一条cDNA链吗?那样的话,电泳是看不到的。除非你合成了cDNA第一条链后又进行特异性扩增。你是用的总RNA为模板反转录吗?如果反转录里面的RNA模板没有除去的话,跑电泳会看到RNA的。因为我觉得你的电泳条带有点象rRNA,所以问问。
4楼2013-04-13 12:00:18
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