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245087116

新虫 (初入文坛)

[求助] cDNA电泳图

第三个泳道是反转后的cDNA电泳图，marker是5000的，感觉反转后的条带比较小，大约在1000bp以下，这样的CDNA能用吗，能扩增出大片段吗，请高手帮忙分析原因，跪谢！！！

电泳图.jpg
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1楼 2013-04-12 16:13:56
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245087116

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-04-14 00:37:41
RNA不会影响PCR，因为DNA聚合酶不能以RNA为模板。你直接PCR就行了。...

恩恩  谢谢你···
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9楼2013-04-16 14:09:11
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普通回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
245087116(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，鼓励应助，分子生物版块期待你的更多精彩。 2013-04-13 10:20:01
反转录后消化RNA模板了吗？电泳的上样量是多少？
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2楼2013-04-13 05:40:14
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245087116

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-04-13 05:40:14
反转录后消化RNA模板了吗？电泳的上样量是多少？

消化RNA模板？啥意思，我反转之前消化的基因组DNA。此电泳上样量为3ul，麻烦您帮我分析一下，谢谢！！！
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3楼2013-04-13 09:05:58
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 245087116 at 2013-04-13 09:05:58
消化RNA模板？啥意思，我反转之前消化的基因组DNA。此电泳上样量为3ul，麻烦您帮我分析一下，谢谢！！！...

你是说只合成了第一条cDNA链吗？那样的话，电泳是看不到的。除非你合成了cDNA第一条链后又进行特异性扩增。你是用的总RNA为模板反转录吗？如果反转录里面的RNA模板没有除去的话，跑电泳会看到RNA的。因为我觉得你的电泳条带有点象rRNA，所以问问。
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4楼2013-04-13 12:00:18
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245087116

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-04-13 12:00:18
你是说只合成了第一条cDNA链吗？那样的话，电泳是看不到的。除非你合成了cDNA第一条链后又进行特异性扩增。你是用的总RNA为模板反转录吗？如果反转录里面的RNA模板没有除去的话，跑电泳会看到RNA的。因为我觉得你的 ...

奥··· 我明白你的意思了，如果是这种情况该怎么办呢，我还没进行PCR呢，如果有rRNA的话，应该对后续没影响吧？谢谢！
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5楼2013-04-13 12:52:40
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mirongsheng

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
先以这个cDNA为模板扩扩你的目的基因，能扩出来就是王道，我们做反转录以后重来不跑cDNA电泳图
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mi
6楼2013-04-13 19:42:16
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by 245087116 at 2013-04-13 12:52:40
奥··· 我明白你的意思了，如果是这种情况该怎么办呢，我还没进行PCR呢，如果有rRNA的话，应该对后续没影响吧？谢谢！...

RNA不会影响PCR，因为DNA聚合酶不能以RNA为模板。你直接PCR就行了。
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7楼2013-04-14 00:37:41
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fanfenggui

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

cDNA跑胶就是看不见东西吧！
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爱由心起！
8楼2013-04-15 16:30:27
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德国工兵铲

金虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-04-14 00:37:41
RNA不会影响PCR，因为DNA聚合酶不能以RNA为模板。你直接PCR就行了。...

我在一本书上看到，RNA是很影响PCR的，因为RNA与镁离子结合的能力非常强，进而影响酶活性。
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10楼2013-04-17 16:56:53
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