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245087116

新虫 (初入文坛)

[求助] cDNA电泳图

第三个泳道是反转后的cDNA电泳图,marker是5000的,感觉反转后的条带比较小,大约在1000bp以下,这样的CDNA能用吗,能扩增出大片段吗,请高手帮忙分析原因,跪谢!!!

电泳图.jpg
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by 245087116 at 2013-04-13 12:52:40
奥··· 我明白你的意思了,如果是这种情况该怎么办呢,我还没进行PCR呢,如果有rRNA的话,应该对后续没影响吧?谢谢!...

RNA不会影响PCR,因为DNA聚合酶不能以RNA为模板。你直接PCR就行了。
7楼2013-04-14 00:37:41
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
245087116(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,鼓励应助,分子生物版块期待你的更多精彩。 2013-04-13 10:20:01
反转录后消化RNA模板了吗?电泳的上样量是多少?
2楼2013-04-13 05:40:14
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245087116

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-04-13 05:40:14
反转录后消化RNA模板了吗?电泳的上样量是多少?

消化RNA模板?啥意思,我反转之前消化的基因组DNA。此电泳上样量为3ul,麻烦您帮我分析一下,谢谢!!!
3楼2013-04-13 09:05:58
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 245087116 at 2013-04-13 09:05:58
消化RNA模板?啥意思,我反转之前消化的基因组DNA。此电泳上样量为3ul,麻烦您帮我分析一下,谢谢!!!...

你是说只合成了第一条cDNA链吗?那样的话,电泳是看不到的。除非你合成了cDNA第一条链后又进行特异性扩增。你是用的总RNA为模板反转录吗?如果反转录里面的RNA模板没有除去的话,跑电泳会看到RNA的。因为我觉得你的电泳条带有点象rRNA,所以问问。
4楼2013-04-13 12:00:18
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