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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于测葡萄糖氧化酶的米氏常数的问题，求教
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creepon

铁虫 (小有名气)

[求助] 关于测葡萄糖氧化酶的米氏常数的问题，求教 已有1人参与

不知道谁有做过葡萄糖氧化酶或者类似酶的米氏常数。就是在相同浓度的GOD下，加入不同浓度的底物，测它们的初速度，然后根据图求出米氏常数。
现在就有一个问题，就是god氧化需要水中溶解氧参与。而水中溶解氧我查了下也才0.25mM。
所以我应该要控制反应时间避免让氧气消耗完。那岂不是我反应最多只生成0.25mM的H2O2了，或者反应最多只消耗0.25mM的葡萄糖了？

我看了下文献，感觉它们都进行好长时间啊，我算了下最终生产的产物或者消耗的葡萄糖都大于1mM了。我哪里弄错了？
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1楼 2013-04-09 22:12:05
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creepon

铁虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by truemoon at 2013-04-11 08:51:11
我是通过走it曲线测的，时间一直测到电流不再增长为止，先算去线性范围，根据线性范围可以算出米氏常熟。助于酶多少u看你的具体情况而论，没有可比性，浓度也没有可比性，你自己多配几个浓度试试。

你是测固定在电极上的酶还是溶液中的酶？
如果是溶液中的酶话。那你应该是将酶跟底物混合，然后开始测电流。最后做出I-t曲线。这时候你怎么根据这个I-t曲线算出反应初速度v？是取反应刚开始的几个点，根据标准工作曲线，做出产物H2O2跟t的P-t图。然后再算出反应初速度的吗？
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5楼2013-04-11 09:31:13
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truemoon

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我做过氧化酶的米氏常数，做之前并没有像你那样查水中的溶解氧问题，因为这是个平衡问题，有消耗就会有新的氧溶解在水中，你只要按照常规的方法去做，做到多少就算多少，不用刻意强求。当然，文章中的数据一般都是做过很多次测试取最好的结果的。
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一条懒虫子
2楼2013-04-10 11:38:51
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creepon

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by truemoon at 2013-04-10 11:38:51
我做过氧化酶的米氏常数，做之前并没有像你那样查水中的溶解氧问题，因为这是个平衡问题，有消耗就会有新的氧溶解在水中，你只要按照常规的方法去做，做到多少就算多少，不用刻意强求。当然，文章中的数据一般都是做 ...

我也打算就这样做了。
请教下，你当时是测GOD米氏常数具体过程是怎样的？能详细说说吗
比如，你酶多少U，glucose浓度是哪几个浓度，反应了多久。

感谢
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3楼2013-04-10 19:18:12
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truemoon

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

我是通过走it曲线测的，时间一直测到电流不再增长为止，先算去线性范围，根据线性范围可以算出米氏常熟。助于酶多少u看你的具体情况而论，没有可比性，浓度也没有可比性，你自己多配几个浓度试试。
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creepon
一条懒虫子
4楼2013-04-11 08:51:11
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