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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 包涵体复性
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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qinhuan0425

新虫 (初入文坛)

[求助] 包涵体复性

我要需要将包涵体变性，复性后挂镍柱纯化！我的蛋白大小是19KD左右，100ml菌液诱导表达后将沉淀溶于1ml缓冲液中，8M尿素变性，4度过夜，过夜后开始透析复性，问题一.1ml蛋白液加到透析袋中体积少吗？透析袋外体积用多少的呢？透析袋用7KD的还是3KD的呢？二：透析复性的尿素浓度8M-6M-4M-2M-0这样吗？三：复性完后透析袋内蛋白液体积会增加吗？
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1楼 2013-04-09 10:01:18
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sunjiutong

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
qinhuan0425(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，鼓励应助，分子生物版块期待你的更多精彩。 2013-04-09 10:44:43
amisking: 回帖置顶 2013-04-09 19:58:30
第一个问题，1ml蛋白液可以透析，放在烧杯里透析即可，最好借助磁力搅拌4摄氏度条件下进行。至于透析袋的大小，根据目的蛋白的大小而定，理论上7kd的袋子可以用。第二个问题，没做过。不敢多说，理论上你的方案可行。第三个问题，透析袋是选择性半透膜，小分子可自由出入。体积会否增加要看你的透析袋内外的水势。仅供参考
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qinhuan0425
所谓梦想，只有醒来才有可能实现
2楼2013-04-09 10:33:26
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qinhuan0425

新虫 (初入文坛)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by sunjiutong at 2013-04-09 10:33:26
第一个问题，1ml蛋白液可以透析，放在烧杯里透析即可，最好借助磁力搅拌4摄氏度条件下进行。至于透析袋的大小，根据目的蛋白的大小而定，理论上7kd的袋子可以用。第二个问题，没做过。不敢多说，理论上你的方案可行 ...

谢谢您的回复！如果透析袋中体积为1ml的话，透析袋外用多少的缓冲液比较合适呢？蛋白浓度的话在什么范围比较合适呢？最后透析完后体积会增加的话一般会增加多少呢？因为我打算用超滤浓缩管浓缩，要考虑买的浓缩管的体积。期待您的回复。
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3楼2013-04-09 10:43:04
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zc10052157

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+1, 鼓励积极发帖帮助解答问题。 2013-04-09 19:58:37
透析完体积变化不大  
包涵体有2M尿素洗干净   电泳条带会很纯  可省去纯化步骤
透析蛋白的浓度尽量低有利于蛋白正确折叠
我们一般蛋白20ML  透析液1L
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hold住
4楼2013-04-09 11:27:57
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qinhuan0425

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by zc10052157 at 2013-04-09 11:27:57
透析完体积变化不大  
包涵体有2M尿素洗干净   电泳条带会很纯  可省去纯化步骤
透析蛋白的浓度尽量低有利于蛋白正确折叠
我们一般蛋白20ML  透析液1L

3Q！你们也是100ml菌液诱导后超声离心的沉淀？
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5楼2013-04-09 12:13:40
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zc10052157

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by qinhuan0425 at 2013-04-09 12:13:40
3Q！你们也是100ml菌液诱导后超声离心的沉淀？...

50ML   沉淀的量很大   一般只用1/5去复性
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qinhuan0425
hold住
6楼2013-04-09 16:20:21
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乐乐3952

铁杆木虫 (正式写手)
学习的
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一花一世界、一叶一菩提
7楼2013-04-09 17:26:21
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qinhuan0425

新虫 (初入文坛)
送红花一朵
引用回帖:
6楼: Originally posted by zc10052157 at 2013-04-09 16:20:21
50ML   沉淀的量很大   一般只用1/5去复性...

谢谢！
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8楼2013-04-09 18:15:41
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steven9188

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1

外透液体积应是内透液体积的至少10倍，看你东西这么少，100倍到1000倍都没有问题。
建议你用逐步降低尿素的浓度梯度换透析液。
另外，复性是个摸索性很强的工作，特定蛋白复性方法和复性效率都不一样的。
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9楼2013-04-11 09:01:57
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qinhuan0425

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by steven9188 at 2013-04-11 09:01:57

外透液体积应是内透液体积的至少10倍，看你东西这么少，100倍到1000倍都没有问题。
建议你用逐步降低尿素的浓度梯度换透析液。
另外，复性是个摸索性很强的工作，特定蛋白复性方法和复性效率都不一样的 ...

3Q!
10楼2013-04-11 09:28:51
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