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qinhuan0425

新虫 (初入文坛)

[求助] 包涵体复性

我要需要将包涵体变性,复性后挂镍柱纯化!我的蛋白大小是19KD左右,100ml菌液诱导表达后将沉淀溶于1ml缓冲液中,8M尿素变性,4度过夜,过夜后开始透析复性,问题一.1ml蛋白液加到透析袋中体积少吗?透析袋外体积用多少的呢?透析袋用7KD的还是3KD的呢?二:透析复性的尿素浓度8M-6M-4M-2M-0这样吗?三:复性完后透析袋内蛋白液体积会增加吗?
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qinhuan0425

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
9楼: Originally posted by steven9188 at 2013-04-11 09:01:57

外透液体积应是内透液体积的至少10倍,看你东西这么少,100倍到1000倍都没有问题。
建议你用逐步降低尿素的浓度梯度换透析液。
另外,复性是个摸索性很强的工作,特定蛋白复性方法和复性效率都不一样的 ...

3Q!
10楼2013-04-11 09:28:51
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sunjiutong

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与,应助指数 +1
qinhuan0425(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,鼓励应助,分子生物版块期待你的更多精彩。 2013-04-09 10:44:43
amisking: 回帖置顶 2013-04-09 19:58:30
第一个问题,1ml蛋白液可以透析,放在烧杯里透析即可,最好借助磁力搅拌4摄氏度条件下进行。至于透析袋的大小,根据目的蛋白的大小而定,理论上7kd的袋子可以用。第二个问题,没做过。不敢多说,理论上你的方案可行。第三个问题,透析袋是选择性半透膜,小分子可自由出入。体积会否增加要看你的透析袋内外的水势。仅供参考

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

所谓梦想,只有醒来才有可能实现
2楼2013-04-09 10:33:26
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qinhuan0425

新虫 (初入文坛)

送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by sunjiutong at 2013-04-09 10:33:26
第一个问题,1ml蛋白液可以透析,放在烧杯里透析即可,最好借助磁力搅拌4摄氏度条件下进行。至于透析袋的大小,根据目的蛋白的大小而定,理论上7kd的袋子可以用。第二个问题,没做过。不敢多说,理论上你的方案可行 ...

谢谢您的回复!如果透析袋中体积为1ml的话,透析袋外用多少的缓冲液比较合适呢?蛋白浓度的话在什么范围比较合适呢?最后透析完后体积会增加的话一般会增加多少呢?因为我打算用超滤浓缩管浓缩,要考虑买的浓缩管的体积。期待您的回复。
3楼2013-04-09 10:43:04
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zc10052157

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与,应助指数 +1
amisking: 金币+1, 鼓励积极发帖帮助解答问题。 2013-04-09 19:58:37
透析完体积变化不大  
包涵体有2M尿素洗干净   电泳条带会很纯  可省去纯化步骤
透析蛋白的浓度尽量低有利于蛋白正确折叠
我们一般蛋白20ML  透析液1L
hold住
4楼2013-04-09 11:27:57
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