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qinhuan0425

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[求助] 包涵体复性

我要需要将包涵体变性，复性后挂镍柱纯化！我的蛋白大小是19KD左右，100ml菌液诱导表达后将沉淀溶于1ml缓冲液中，8M尿素变性，4度过夜，过夜后开始透析复性，问题一.1ml蛋白液加到透析袋中体积少吗？透析袋外体积用多少的呢？透析袋用7KD的还是3KD的呢？二：透析复性的尿素浓度8M-6M-4M-2M-0这样吗？三：复性完后透析袋内蛋白液体积会增加吗？

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1楼 2013-04-09 10:01:18

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sunjiutong

金虫 (著名写手)

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【答案】应助回帖

★
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qinhuan0425(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，鼓励应助，分子生物版块期待你的更多精彩。 2013-04-09 10:44:43
amisking: 回帖置顶 2013-04-09 19:58:30

第一个问题，1ml蛋白液可以透析，放在烧杯里透析即可，最好借助磁力搅拌4摄氏度条件下进行。至于透析袋的大小，根据目的蛋白的大小而定，理论上7kd的袋子可以用。第二个问题，没做过。不敢多说，理论上你的方案可行。第三个问题，透析袋是选择性半透膜，小分子可自由出入。体积会否增加要看你的透析袋内外的水势。仅供参考

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qinhuan0425

所谓梦想，只有醒来才有可能实现

2楼2013-04-09 10:33:26

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qinhuan0425

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引用回帖:

2楼: Originally posted by sunjiutong at 2013-04-09 10:33:26
第一个问题，1ml蛋白液可以透析，放在烧杯里透析即可，最好借助磁力搅拌4摄氏度条件下进行。至于透析袋的大小，根据目的蛋白的大小而定，理论上7kd的袋子可以用。第二个问题，没做过。不敢多说，理论上你的方案可行 ...

谢谢您的回复！如果透析袋中体积为1ml的话，透析袋外用多少的缓冲液比较合适呢？蛋白浓度的话在什么范围比较合适呢？最后透析完后体积会增加的话一般会增加多少呢？因为我打算用超滤浓缩管浓缩，要考虑买的浓缩管的体积。期待您的回复。

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3楼2013-04-09 10:43:04

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