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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 基因与载体连接转化后涂版长出了菌，提质粒却没有提出来，不知道什么原因？？
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aeo22

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
我晴天一片(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，鼓励应助，分子生物版块期待你的更多精彩。 2013-04-09 18:02:08
gyesang: 回帖置顶 2013-05-04 19:32:15
你转的感受态是什么菌种啊？
建议你摇完菌先闻一下菌的味道，如果是正常的大肠杆菌会有一股奶香味，如果是有一股让你想吐的恶臭味或者非大肠杆菌的怪味，就扔了吧。。。加溶液2不变澄清也扔了吧（大肠杆菌）。。。
如果抗生素失效，你会得到满板密密麻麻的菌，有质粒没质粒都长。。。
抽不出质粒，要么你抽的过程出问题；要么那个菌没有质粒的，杂菌；要么板上的菌正确，你摇菌培养污染了，摇起来的不是你要的菌，kana也非万能的。。。
要是自连长起来也是携带有质粒啊。。。
还是菌落PCR先鉴定吧
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11楼2013-04-09 01:20:41
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panyuzhu

禁虫 (小有名气)
★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-04 19:32:27
本帖内容被屏蔽
12楼2013-04-09 14:04:49
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shine372

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-04 19:32:33
首先要看下你筛选用的平板抗性是否正确以及是否还有抗性，其次转化后导致培养的平板培养超过24h才长出单菌落建议还是重新连接转化，第三你挑取的单克隆可以先用快速鉴定液先鉴定下再提取质粒或者测序，或者先用菌落PCR先鉴定下再提取质粒或者测序这样可以少做很多无用功，希望对您有帮助！
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13楼2013-04-09 17:11:50
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swallow_sun

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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感谢参与，应助指数 +1
我晴天一片(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，鼓励应助，分子生物版块期待你的更多精彩。 2013-04-09 18:02:21
做连接首先你要确定一下几点：
1、抗生素是否失效（抗性平板直接涂布感受态细胞）
2、质粒转化感受态做阳性对照
3、胶回收的酶切产物电泳验证是否有条带
4、质粒试剂盒提个带质粒的菌做对照
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14楼2013-04-09 17:46:49
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wangchclove

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-04 19:32:41
如果没有质粒 摇菌应该摇不起来的  可能是质粒提取的有问题  重新挑菌 先菌落PCR验证
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Good
15楼2013-04-09 22:57:42
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黄小怪

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-04 19:32:52
楼主 可以使用空白载体做一对照，避免阴性克隆
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你必须非常努力，才能看起来毫不费力
16楼2013-05-04 09:35:44
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孙小爽

铁虫 (初入文坛)
缩短生长时间，有可能是卫星菌落，Amp没过期吧？
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17楼2014-03-10 19:19:35
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huanzhi212

铁虫 (初入文坛)
挑单菌落之后需要摇菌鉴定先的，我一般都会挑7个菌做鉴定，连接后转化涂板挑菌落，有一半以上含有你所需要的目的片段就很好了
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我思故我在
18楼2014-03-10 22:01:51
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