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我晴天一片

新虫 (初入文坛)

[求助] 基因与载体连接转化后涂版长出了菌,提质粒却没有提出来,不知道什么原因??

基因与载体PET-28a连接转化后涂板长出了菌,挑单克隆后摇试管提质粒却没有提出来,不知道什么原因??是连接失败还是怎么回事?连接失败的原因是什么呢?
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aeo22

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
我晴天一片(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,鼓励应助,分子生物版块期待你的更多精彩。 2013-04-09 18:02:08
gyesang: 回帖置顶 2013-05-04 19:32:15
你转的感受态是什么菌种啊?
建议你摇完菌先闻一下菌的味道,如果是正常的大肠杆菌会有一股奶香味,如果是有一股让你想吐的恶臭味或者非大肠杆菌的怪味,就扔了吧。。。加溶液2不变澄清也扔了吧(大肠杆菌)。。。
如果抗生素失效,你会得到满板密密麻麻的菌,有质粒没质粒都长。。。
抽不出质粒,要么你抽的过程出问题;要么那个菌没有质粒的,杂菌;要么板上的菌正确,你摇菌培养污染了,摇起来的不是你要的菌,kana也非万能的。。。
要是自连长起来也是携带有质粒啊。。。
还是菌落PCR先鉴定吧
11楼2013-04-09 01:20:41
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shangming

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香。生物版块欢迎你的无私奉献。 2013-04-07 11:53:02
用的是amp抗性的话,培养12h左右长出来的才是抗性菌落,时间再长amp抗性就失效了,然后就会长出很多卫星菌落,这些卫星菌落基本上不含质粒,所以你在抗性培养基中培养长不出来。
2楼2013-04-07 11:12:34
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留小保

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
有可能连接失败有可能是提取质粒出问题
人生若只如初见 何事秋风悲画扇
3楼2013-04-07 11:22:31
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Haibara_Ai

铜虫 (小有名气)


我晴天一片(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-05-04 19:31:13
ls回答前至少看一下吧 pet28a的抗性是kan  没卫星菌落的
LZ可以的话先做个colony pcr预筛选下。
4楼2013-04-07 11:23:00
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