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miaomiaomao

金虫 (小有名气)


[交流] 过凝胶柱怎么选择洗脱剂

各位大侠帮帮忙
本人的样品易溶于水,微溶于甲醇,之前试过ODS柱,洗脱系统为甲醇-水,但是分离效果不好,在前面几管就几乎全下来了,现在打算试试凝胶柱,该选择什么洗脱剂呢?如果选用磷酸盐缓冲液,那该怎么配制呢?浓度多少?pH多少?
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顺风顺水

铜虫 (初入文坛)


★ ★
miaomiaomao(金币+2): 谢谢参与
豆哥: 金币+1, 谢谢 2013-04-03 09:46:22
0.01PBS (135 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 1.5 mM KH2PO4, and 8 mM K2HPO4,pH 7.2)
关键还得看你的物质在何种缓冲液稳定 PH多少。你用的什么凝胶 葡聚糖  琼脂糖 还是纤维素 基本上都是分子赛,有的还有点反向作用。如果分不开,那就用反向层析树脂试试或者离子交换层析树脂试试,或者两个一块用,基本上水溶性的物质都能搞定了,欧了。
2楼2013-04-02 12:48:19
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miaomiaomao

金虫 (小有名气)


引用回帖:
2楼: Originally posted by 顺风顺水 at 2013-04-02 12:48:19
0.01PBS (135 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 1.5 mM KH2PO4, and 8 mM K2HPO4,pH 7.2)
关键还得看你的物质在何种缓冲液稳定 PH多少。你用的什么凝胶 葡聚糖  琼脂糖 还是纤维素 基本上都是分子赛,有的还有点反向作用。如 ...

谢谢!我也不清楚我的物质在什么条件稳定,有没有通用的一种洗脱剂?哪种凝胶对我的样品分离效果会好点?唉,我现在才刚入门,懂得太少了
3楼2013-04-02 15:50:02
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fyz7232

木虫 (知名作家)


★
miaomiaomao(金币+2): 谢谢参与
不是特别清楚
5楼2013-04-03 08:41:20
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wwwtony

铁杆木虫 (正式写手)


★ ★
miaomiaomao(金币+2): 谢谢参与
PSA: 金币+1, 谢谢交流,常来哦 2013-04-03 11:29:55
你的样品是什么类型的,可能极性比较大,反相不能保留,薄层展开有点吗,考虑先用MCI砍段,水溶后样品直接上样,甲醇水系统梯度洗脱,然后用分水溶性成分的凝胶纯化后,用高效液相制备。
6楼2013-04-03 09:34:05
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huaqiangliu

新虫 (小有名气)


★
miaomiaomao(金币+2): 谢谢参与
引用回帖:
6楼: Originally posted by wwwtony at 2013-04-03 09:34:05
你的样品是什么类型的,可能极性比较大,反相不能保留,薄层展开有点吗,考虑先用MCI砍段,水溶后样品直接上样,甲醇水系统梯度洗脱,然后用分水溶性成分的凝胶纯化后,用高效液相制备。

.回答的有点矛盾了
7楼2013-04-03 10:14:44
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顺风顺水

铜虫 (初入文坛)


★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
PSA: 金币+1, 鼓励新虫,常来哦! 2013-04-03 11:30:06
同意五楼说的中间部分,用SKP-10-4300 或MCI进行分离。再用反向硅胶或离子交换层析树脂试试咯。好运
8楼2013-04-03 11:02:13
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miaomiaomao

金虫 (小有名气)


引用回帖:
7楼: Originally posted by huaqiangliu at 2013-04-03 10:14:44
.回答的有点矛盾了...

大侠有什么指点?
9楼2013-06-20 11:55:20
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miaomiaomao

金虫 (小有名气)


引用回帖:
6楼: Originally posted by wwwtony at 2013-04-03 09:34:05
你的样品是什么类型的,可能极性比较大,反相不能保留,薄层展开有点吗,考虑先用MCI砍段,水溶后样品直接上样,甲醇水系统梯度洗脱,然后用分水溶性成分的凝胶纯化后,用高效液相制备。

我的极性是比较大,不是说极性大的用反相吗?可是也不见有什么分离效果。薄层展开没什么点,大多数呈线。
10楼2013-06-20 11:57:06
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tanbingxin

新虫 (小有名气)


★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我最近也想用凝胶分离东西,分的东西极性比较小。硅胶点板,10%甲醇-氯仿系统两个点展的很开。因为样品很少只有10几mg,想用凝胶分。不知道怎么选洗脱液啊!求助。。。。。
11楼2015-03-28 12:33:41
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简单回复
syhorchid4楼
2013-04-03 03:19   回复  
miaomiaomao(金币+2): 谢谢参与
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