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chenhw06

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[交流] HPLC 流动相的操作

请问大家，HPLC流动相是4：1的乙腈和水。之前都是先混合再过滤超声到一个瓶子，这次想省事，就分别过滤用两个瓶子装着，然后将设置A（乙腈）管道80%，B（水）管道20%，混合。（两者混合的时候应该会产生起泡，对柱子什么有没有影响？）你们一般都是怎么做的呐？

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1楼 2013-04-02 00:03:08

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chenhw06

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引用回帖:

9楼: Originally posted by akosrios at 2013-04-02 09:51:40
用的什么色谱柱

如果是反相柱，80%的乙腈洗脱太强，从图上看楼主的物质几乎没有保留，适当降低乙腈比例，或者使用梯度洗脱

另外，尽量用流动相或者水相溶解样品，不要用纯乙腈，容易有溶剂效应影响峰型...

您帮忙看一下谱图吧，这个是用乙腈和水2：1做流动相测的，乙腈为溶剂，最后标曲R2=0.9968（278 nm ）。①标样在210 nm吸收比较大，但是峰行不好，下面是1 mg/mL、0.5 mg/mL、0.3 mg/mL、0.1 mg/mL时候的峰，1和0.5峰头比较圆，这是不是浓度比较大的原因？0.3峰还好，0.1峰前伸，这个是因为什么？（乙腈为溶剂产生的？）②278 nm的时候吸收较弱，但1 mg/mL~0.3 mg/mL峰形都蛮好，不过0.1 mg/mL峰前伸，这是因为什么哪？这个测的标曲可以用吗？请您指点啊。

1mg/mL（210nm）.png

0.5mg/mL（210nm）.png

0.3mg/mL（210nm）.png

0.1mg/mL（210nm）.png

1mg/mL（278nm）.png

0.3mg/mL（278nm）.png

0.1mg/mL（278nm）.png