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宝贝猪301木虫 (正式写手)
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[求助]
急！！！黄酮苷过LH-20凝胶柱的相关问题！
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小弟需要分离纯化几种黄酮苷，这几种黄酮苷挂有一个或两个糖。 现有几点疑问： 1、纯甲醇和50%甲醇谁的洗脱能力强？ 2、选用什么洗脱剂最合适？ 3、之前用过50%甲醇洗脱，整个柱子都变黄了，仅仅洗脱下来部分物质。今天尝试了纯甲醇洗脱，柱头3cm为白色，其余部分也是全部变黄，同样仅仅洗脱下来部分物质。两次均是大部分物质挂在柱子上洗不下来！有什么好的办法么？！ 4、有没有其它可以分离这种大极性黄酮苷的办法？！（PS：条件有限，没办法用制备）  望各位大神给予指导！  [ 来自科研家族 Natural Products家族 ] |
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【答案】应助回帖
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宝贝猪301: 金币+5, ★★★★★最佳答案 2013-05-09 12:17:37
宝贝猪301: 金币+5, ★★★★★最佳答案 2013-05-09 12:17:37
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SephadexLH20是非常适合分离天然产物的一类凝胶产品，它在不同溶剂中有不同的溶胀系数。 能分离100-4000Da的化合物！ 请问楼主你用的是多大的柱子装SephadexLH20？ 我们实验室甲醇系统凝胶柱是装在长2米，直径3.5厘米的玻璃柱中。 我用该柱分离过数量众多的黄酮及黄酮苷类化合物，效果非常不错！ 我估计楼主有两方面的原因！一个是柱床不稳定，也就是柱子没装好填料，凝胶柱不能像硅胶柱那样随便。 切记不能有气泡和断层。填料充分的溶剂系统泡胀后，以匀浆装入玻璃柱中，待凝胶不再自然沉降时加入大量 溶剂系统进行冲洗！使柱床压实，最后上样！ 还有就是流速的问题，依照我的使用经验，分离黄酮及糖苷类化合物流速在10-15秒/滴，下午三四点种开始上样，第二天早上或者中午就可以拿到馏分！有没有分开在晚上就可以看见是否有多个黄色的色带。 |
21楼2013-05-09 09:57:30
yunnanyan
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