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宝贝猪301

木虫 (正式写手)

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[求助] 急！！！黄酮苷过LH-20凝胶柱的相关问题！

小弟需要分离纯化几种黄酮苷，这几种黄酮苷挂有一个或两个糖。

现有几点疑问：

1、纯甲醇和50%甲醇谁的洗脱能力强？

2、选用什么洗脱剂最合适？

3、之前用过50%甲醇洗脱，整个柱子都变黄了，仅仅洗脱下来部分物质。今天尝试了纯甲醇洗脱，柱头3cm为白色，其余部分也是全部变黄，同样仅仅洗脱下来部分物质。两次均是大部分物质挂在柱子上洗不下来！有什么好的办法么？！

4、有没有其它可以分离这种大极性黄酮苷的办法？！（PS：条件有限，没办法用制备）

望各位大神给予指导！

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我...明明努力了！

1楼 2013-03-31 17:22:46

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tonypengt

木虫 (正式写手)

荒唐书生

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
宝贝猪301: 金币+5, ★★★★★最佳答案 2013-05-09 12:17:37

SephadexLH20是非常适合分离天然产物的一类凝胶产品，它在不同溶剂中有不同的溶胀系数。
能分离100-4000Da的化合物！
请问楼主你用的是多大的柱子装SephadexLH20？
我们实验室甲醇系统凝胶柱是装在长2米，直径3.5厘米的玻璃柱中。
我用该柱分离过数量众多的黄酮及黄酮苷类化合物，效果非常不错！
我估计楼主有两方面的原因！一个是柱床不稳定，也就是柱子没装好填料，凝胶柱不能像硅胶柱那样随便。
切记不能有气泡和断层。填料充分的溶剂系统泡胀后，以匀浆装入玻璃柱中，待凝胶不再自然沉降时加入大量
溶剂系统进行冲洗！使柱床压实，最后上样！
还有就是流速的问题，依照我的使用经验，分离黄酮及糖苷类化合物流速在10-15秒/滴，下午三四点种开始上样，第二天早上或者中午就可以拿到馏分！有没有分开在晚上就可以看见是否有多个黄色的色带。