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zs416铁虫 (小有名气)
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PCR小白，请教个关于NCBI的问题
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| PCR小白一枚，不会设计引物，想在NCBI上找个文章中的现成引物。已经在NCBI上找到该基因了，但是，不知道怎么由基因的同源序列那里反过去查文章，请高手们教教我。 |
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| 关于引物设计 很多人都选择使用软件什么的 那肯定会很好。从我们实验室来讲 从来不使用（除了一些特殊的PCR外）我们设计引物真的很随意的 就在你的目的基因的上下游随机取上18-20bp的序列（如果是从基因组上扩增就适当在长一点），有需要酶切位点的加上再加上保护碱基（有时候就达到近30bp），有的时候上下游退火温度相差很大，使用梯度或者Touchdown很随意就p出目的条带了，百试不爽。当然可以注意一下3‘末端最后一个碱基避免T |
6楼2013-04-02 20:46:21