24小时热门版块排行榜    

查看: 174  |  回复: 4
当前主题已经存档。
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

DDT+啄木鸟

[交流] 菌落PCR

我用蓝白斑筛选,挑取白色菌落做菌落PCR(用的是载体上的通用引物),一直P不出来,连接转化也没多大问题,请教高手分析一下问题所在。谢谢!

» 猜你喜欢

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yzh-1999

至尊木虫 (著名写手)

其实的办法bigJake的办法是最好的办法!
强则极辱,情深不寿
4楼2007-09-08 10:45:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 5 个回答

BigJake

铁杆木虫 (著名写手)

★ ★
DDT+啄木鸟(金币+2,VIP+0):谢谢你的帮助,两个金币请笑纳!
我觉得先做个实验确认一下你的载体上的引物吧:挑取白斑的时候同时挑取一个蓝斑,最好先在液体培养基中培养大约8h后,取1ul的培养液进行PCR,如果蓝斑 PCR也没有条带的话就应该是引物的问题啦;
如果蓝斑有条带,而白斑没有,那我想,可能那些白斑就是假阳性了。不知道楼主的白斑多不多,如果很多的话,那较大的可能就是污染的菌,别的菌,可能根本就不是宿主菌。这种情况建议重新做感受态。

另外,如果楼主有目的条带的引物的话,可以直接用插入片段的条带扩增试试看,同样以蓝斑做对照。

祝好运!
2楼2007-09-08 08:51:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wu2008yao

木虫 (小有名气)


DDT+啄木鸟(金币+1,VIP+0):xiexie
我觉得是你的连接有问题
目的片段没有连到载体上去
这样导致假阳性特别多,另外最好说下具体的过程!
生命是一团欲望,欲望不满足便痛苦,满足便无聊。人生就在痛苦和无聊之间摇摆!
3楼2007-09-08 09:26:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xujian568

至尊木虫 (著名写手)

Count XU

做过几次菌落PCR,感觉可信度并不是很强,不过是挺方便的,要注意挑斑的时候要准,P出来的片段后的验证比较重要,最好还是酶切一下。有时会有假阳性出现。
P不出的可能原因有很多的,比如菌的问题,杂质太多破坏了PCR的体系,引物的特异性也很重要,等等......
活着就要让人感受到你的存在。
5楼2007-09-09 20:44:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿国科过程所081700,274求调剂 +3 三水研0水立方 2026-03-23 3/150 2026-03-23 23:11 by MajorWen
[考研] 384求调剂 +3 子系博 2026-03-22 6/300 2026-03-23 21:45 by 子系博
[考研] 352求调剂 +3 大米饭! 2026-03-22 3/150 2026-03-22 23:28 by king123!
[考研] 293求调剂 +3 涛涛Wjt 2026-03-22 5/250 2026-03-22 22:21 by jiangpengfei
[考研] 307求调剂 +11 冷笙123 2026-03-17 11/550 2026-03-22 20:16 by edmund7
[考研] 一志愿 西北大学 ,070300化学学硕,总分287,双非一本,求调剂。 +3 晨昏线与星海 2026-03-20 3/150 2026-03-22 16:00 by ColorlessPI
[考研] 319求调剂 +4 小力气珂珂 2026-03-20 4/200 2026-03-22 15:53 by ColorlessPI
[考研] 生物学调剂 +5 Surekei 2026-03-21 5/250 2026-03-22 14:39 by tcx007
[考研] 广西大学材料导师推荐 +3 夏夏夏小正 2026-03-17 5/250 2026-03-21 22:20 by 金昊ML
[考研] 297求调剂 +3 喜欢还是不甘心 2026-03-20 3/150 2026-03-21 18:33 by 学员8dgXkO
[考研] 【考研调剂】化学专业 281分,一志愿四川大学,诚心求调剂 +11 吃吃吃才有意义 2026-03-19 11/550 2026-03-21 18:23 by 学员8dgXkO
[考研] 0703化学297求调剂 +3 Daisy☆ 2026-03-20 3/150 2026-03-21 17:45 by ColorlessPI
[考研] 307求调剂 +3 wyyyqx 2026-03-17 3/150 2026-03-21 03:20 by JourneyLucky
[考研] 初始318分求调剂(有工作经验) +3 1911236844 2026-03-17 3/150 2026-03-21 02:33 by JourneyLucky
[考研] 一志愿华中科技大学,080502,354分求调剂 +5 守候夕阳CF 2026-03-18 5/250 2026-03-21 01:06 by JourneyLucky
[考研] 一志愿 西北大学 ,070300化学学硕,总分287,双非一本,求调剂。 +3 晨昏线与星海 2026-03-18 3/150 2026-03-21 00:46 by JourneyLucky
[考研] 求调剂一志愿南京航空航天大学289分 +3 @taotao 2026-03-19 3/150 2026-03-20 21:34 by JourneyLucky
[考研] 材料学求调剂 +4 Stella_Yao 2026-03-20 4/200 2026-03-20 20:28 by ms629
[考博] 申博26年 +3 八6八68 2026-03-19 3/150 2026-03-19 19:43 by nxgogo
[考研] 考研求调剂 +3 橘颂. 2026-03-17 4/200 2026-03-17 21:43 by 有只狸奴
信息提示
请填处理意见