24小时热门版块排行榜    

查看: 229  |  回复: 4
当前主题已经存档。

DDT+啄木鸟

[交流] 菌落PCR

我用蓝白斑筛选,挑取白色菌落做菌落PCR(用的是载体上的通用引物),一直P不出来,连接转化也没多大问题,请教高手分析一下问题所在。谢谢!

» 猜你喜欢

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

BigJake

铁杆木虫 (著名写手)

★ ★
DDT+啄木鸟(金币+2,VIP+0):谢谢你的帮助,两个金币请笑纳!
我觉得先做个实验确认一下你的载体上的引物吧:挑取白斑的时候同时挑取一个蓝斑,最好先在液体培养基中培养大约8h后,取1ul的培养液进行PCR,如果蓝斑 PCR也没有条带的话就应该是引物的问题啦;
如果蓝斑有条带,而白斑没有,那我想,可能那些白斑就是假阳性了。不知道楼主的白斑多不多,如果很多的话,那较大的可能就是污染的菌,别的菌,可能根本就不是宿主菌。这种情况建议重新做感受态。

另外,如果楼主有目的条带的引物的话,可以直接用插入片段的条带扩增试试看,同样以蓝斑做对照。

祝好运!
2楼2007-09-08 08:51:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wu2008yao

木虫 (小有名气)


DDT+啄木鸟(金币+1,VIP+0):xiexie
我觉得是你的连接有问题
目的片段没有连到载体上去
这样导致假阳性特别多,另外最好说下具体的过程!
生命是一团欲望,欲望不满足便痛苦,满足便无聊。人生就在痛苦和无聊之间摇摆!
3楼2007-09-08 09:26:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yzh-1999

至尊木虫 (著名写手)

其实的办法bigJake的办法是最好的办法!
强则极辱,情深不寿
4楼2007-09-08 10:45:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xujian568

至尊木虫 (著名写手)

Count XU

做过几次菌落PCR,感觉可信度并不是很强,不过是挺方便的,要注意挑斑的时候要准,P出来的片段后的验证比较重要,最好还是酶切一下。有时会有假阳性出现。
P不出的可能原因有很多的,比如菌的问题,杂质太多破坏了PCR的体系,引物的特异性也很重要,等等......
活着就要让人感受到你的存在。
5楼2007-09-09 20:44:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 DDT+啄木鸟 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 看来今天不会放榜了? +8 chengyan1220 2026-08-21 9/450 2026-08-21 15:38 by dcqxinyang
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +7 angus9576 2026-08-17 12/600 2026-08-21 13:38 by weiyin
[基金申请] 我面上完蛋了 +7 且听虎啸 2026-08-20 8/400 2026-08-21 12:31 by 酷酷墨镜
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +23 yaoyewhu2008 2026-08-20 25/1250 2026-08-21 12:19 by Poppy1104
[基金申请] 什么时候开奖? +7 CrisMessi 2026-08-18 7/350 2026-08-21 12:15 by weiyin
[基金申请] 时间戳又变了 +12 wuchongjun 2026-08-20 18/900 2026-08-21 11:53 by wuchongjun
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +15 archvillain 2026-08-15 27/1350 2026-08-21 11:32 by tim76
[基金申请] 今天基金会出结果吗?20260819 +15 kkkl_v 2026-08-19 16/800 2026-08-21 11:22 by 365372687
[论文投稿] 投稿咨询 +5 wwm09 2026-08-17 7/350 2026-08-21 10:11 by 期刊论文帮手
[基金申请] 放榜前的不淡定 40+4 snowwithsea 2026-08-19 13/650 2026-08-21 08:30 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 估计是周四 +3 archvillain 2026-08-18 3/150 2026-08-21 01:48 by jnhyjjm
[基金申请] 今天系统多次维护,明天很可能放榜! +10 zju2000 2026-08-16 11/550 2026-08-20 20:02 by cl479861084
[基金申请] 时间戳变了,能看出什么问题? +18 基诺咪客 2026-08-17 23/1150 2026-08-20 17:19 by Godzela
[基金申请] 重要消息,中午系统在维护 +11 yuleib84 2026-08-18 12/600 2026-08-20 11:09 by xskun
[基金申请] 今天放榜吗? +14 布布和一二 2026-08-19 15/750 2026-08-19 18:07 by gltch
[基金申请] 2027广东省杰青 +4 奶牛小黑 2026-08-15 10/500 2026-08-19 11:02 by wanfengnew
[基金申请] 朋友圈看到的 +6 wangzilk 2026-08-18 8/400 2026-08-19 10:55 by Haru815
[基金申请] 快农历七夕节了,轻松一下,男人悄悄话,女施主请不要进来。 +6 Tide man 2026-08-14 7/350 2026-08-19 09:56 by ZJTJZ
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +4 且听虎啸 2026-08-17 5/250 2026-08-18 00:49 by 蔡棒棒菂
信息提示
请填处理意见