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淋巴细胞培养
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打算分离淋巴细胞观察它对肿瘤细胞的杀伤实验。看了文献，有几个不懂的地反： 假若要提cd4+T细胞，那么用磁珠从PBMC中分选出来的T细胞是否是未活化的， （1）所以，做杀伤实验的时候要加anti-CD3/anti-CD28 beads，IL-2？原理是什么？ （2）anti-CD3/anti-CD28 beads 是否可以用其它试剂代替 （3）irradiated feeder cells究竟是什么？是把它加到分选出来的T细胞里面一起培养么？那么不久混起来了？ （4）如果只做急性的实验，不要稳定传代的T细胞，是否可以略去上面步骤？ 非常感谢！！别嫌我吝啬啊，只有两个金币，全部悬赏…… |
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2楼2013-04-18 15:21:06
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致T细胞增殖和活化的下游信号的激活，从而使T细胞增殖和活化。也就是说，CD3激发型单抗能 够模拟抗原与TCR/CD3复合物的识别和激活过程，从而引起T细胞的增殖与活化，因此是CIK细胞培养中不可或缺的刺激因素。? ? ?? ???此外，CD3激发型单抗在选用时一定要注意克隆号。研究表明，仅克隆号为OKT-3的CD3激发型单抗可以刺激所有人的T细胞的增殖，而其它克隆号的CD3激发型单抗仅能刺激一部分人的T细胞。因此，在进行CIK培养时，最好选用OKT-3克隆，以保证每个患者的T细胞均能被激活。 ? ?? ?? ?IL-2 (白细胞介素-2) ? ?? ???IL-2最初发现时被称为T细胞生长因子(T cell growth factor, TCGF)，是引起T细胞增殖最重要的细胞因 子。IL-2既是自分泌细胞因子，也是旁分泌细胞因子，其通过与T细胞表面的IL-2受体(IL-2R)的特异性结合而促使T细胞活化，并进入细胞分裂状态。此外，IL-2还可刺激NK细胞的生长并增强其杀伤能力。因此CIK 细胞培养中须添加IL-2，以促进T细胞的增殖与活化。 ? ?? ?? ?IFN-y(干扰素-y) ? ?? ???IFN-y;具有上调外周血淋巴细胞表面IL-2R表达的作用，因此会增强T细胞对IL-2促增殖反应的敏感度和 强度。在诱导CIK细胞形成的过程中加入IFN-? ，可降低IL-2的用量。研究发现，IFN-y加入的顺序与CIK的 细胞毒活性密切相关。先加入IFN-y，培养24后再加入IL-2，可明显提高CIK的细胞毒活性。第二个问题的答案。  发自小木虫Android客户端 |
3楼2017-05-24 00:36:01
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? ?? ???CD3激发型单抗： ? ?? ? T细胞活化的第一信号来自于T细胞表面的受体，即T细胞抗原受体(T cell antigen receptor, TCR)与APC提呈的抗原的特异性结合，也就是T细胞对抗原的特异性识别。TCR是由2条不同肽链构成的异二聚体，在T细胞表面，其与CD3分子通过非共价键结合，形成TCR/CD3复合体。TCR识别特异性抗原后会引起CD3和T细胞表面的辅助受体CD4或CD8分子的胞浆尾部聚集，进而激活与胞浆尾部相连的酪氨酸激酶(Lck, Fyn和ZAP-70等)，促使CD3分子胞浆区的免疫受体酪氨酸活化基序(immunoreceptor tyrosine-based activation motif, ITAM)中的酪氨酸(Y)磷酸化。磷酸化的酪氨酸(pY)进一步磷酸化下游含酪氨酸的蛋白，从而引起激酶活化的级联反应(磷脂酰肌醇途径或MAP激酶途径等)，最终通过激活转录因子，使其进入细胞核内，结合于调控T细胞增殖和活化的靶基因(如IL-2和IFN-?等)，引起基因的表达和转录，T细胞因而由静止状态转为增殖和活化状态。 发自小木虫Android客户端 |
4楼2017-05-24 00:37:27