应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 双酶切
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
71/1返回列表
查看: 682  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

碧海行帆

金虫 (初入文坛)

[求助] 双酶切

一个片段加上 spe1 xbal 双连个酶切位点后，连到载体上，在用这两个酶进行双酶切，切不开怎么办，片段测序后，酶切位点没有发生突变！
回复此楼

» 猜你喜欢
硕士毕业去找工作
1楼 2013-03-13 16:51:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖置顶 ( 共有1个 )

gaojuan1985

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+3, 鼓励积极发帖帮助解答问题。 2013-03-13 20:04:10
amisking: 回帖置顶 2013-03-13 20:04:12
碧海行帆: 金币+2 2013-03-14 10:53:32
1.确定酶是正常的，切别的试试能不能切开。
2.查看在酶切位点及周围上有没有甲基化位点。我们有一次用BamHI，就发现转化到大肠杆菌中再提出来的质粒，怎么也切不开了。后来发现是BamHI和旁边临近的几个碱基形成了一个甲基化位点，导致切不开了。
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2013-03-13 16:57:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+2, 鼓励积极发帖帮助解答问题。 2013-03-13 20:04:17
碧海行帆: 金币+2 2013-03-14 10:53:42
看看XbaI的位点前后有没有GA和TC，就是这样的序列，GA TCTAGA TC，切不开，可能是XbaI被甲基化了
赞一下 回复此楼
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
3楼2013-03-13 18:46:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hy_sandra

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+1, 鼓励发帖交流！ 2013-03-13 20:04:24
碧海行帆: 金币+2 2013-03-14 10:53:50
有不會甲基化的competent cell可供製備載體用，忘了是那一種了，搜尋一下應可找到
赞一下 回复此楼
科研是無止盡的
4楼2013-03-13 19:35:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

碧海行帆

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gaojuan1985 at 2013-03-13 16:57:52
1.确定酶是正常的，切别的试试能不能切开。
2.查看在酶切位点及周围上有没有甲基化位点。我们有一次用BamHI，就发现转化到大肠杆菌中再提出来的质粒，怎么也切不开了。后来发现是BamHI和旁边临近的几个碱基形成了一 ...

咋看甲基化位点啊，如果甲基化了怎么办啊
赞一下 回复此楼
硕士毕业去找工作
5楼2013-03-14 10:08:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

碧海行帆

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by gyesang at 2013-03-13 18:46:56
看看XbaI的位点前后有没有GA和TC，就是这样的序列，GA TCTAGA TC，切不开，可能是XbaI被甲基化了

甲基化了怎么办啊
赞一下 回复此楼
硕士毕业去找工作
6楼2013-03-14 10:12:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★
碧海行帆: 金币+2 2013-03-14 10:53:10
引用回帖:
6楼: Originally posted by 碧海行帆 at 2013-03-14 10:12:19
甲基化了怎么办啊...

有两个解决方案：
1. 重新设计引物，把XbaI位点的甲基化位点突变掉

2. 把这个质粒转到甲基化酶敲除的大肠杆菌中，比如JM110，提取非甲基化的质粒再做酶切
赞一下 回复此楼
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
7楼2013-03-14 10:25:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 碧海行帆 的主题更新
71/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料调剂 +12 一样YWY 2026-04-04 12/600 2026-04-05 08:24 by 544594351
[考研] 288环境专硕,求调材料方向 +13 lllllos 2026-04-04 14/700 2026-04-04 23:34 by lqwchd
[考研] 26考研调剂0710 0860 +9 补补不补 2026-04-03 14/700 2026-04-04 23:32 by 果冻大王
[考研] 085600调剂 +4 1amJJ 2026-04-02 4/200 2026-04-04 21:53 by hemengdong
[考研] 调剂 +4 是可乐不是可乐 2026-04-04 4/200 2026-04-04 19:41 by 唐沐儿
[考研] 348分环境工程·调剂 +10 吴彦祖24k 2026-04-03 11/550 2026-04-04 14:19 by 无际的草原
[考研] 085701求调剂 +7 龚禹铭 2026-04-04 8/400 2026-04-04 13:49 by 小小树2024
[考研] 311求调剂 +11 勇敢的小吴 2026-04-02 11/550 2026-04-03 21:46 by qlm5820
[考研] 本科985，专业0812分336求调剂 +4 莫莫很行 2026-04-03 4/200 2026-04-03 21:31 by zhq0425
[考研] 295求调剂 +6 FZAC123 2026-04-03 6/300 2026-04-03 21:01 by zhq0425
[考研] 兽医调剂 +3 wh119216 2026-04-02 3/150 2026-04-03 19:34 by zrongyan
[考研] 学硕机械工程303求调剂 +6 无名所以叫吴明 2026-03-30 7/350 2026-04-03 16:48 by asdfzly
[考研] 考研调剂 +8 不爱喝饮料 2026-04-03 8/400 2026-04-03 16:40 by Mistake-J
[考研] 316求调剂 +14 舟自梗 2026-04-01 18/900 2026-04-03 10:28 by linyelide
[考研] 一志愿北京科技材料科学与工程288分，求调剂 +14 是辰啊 2026-04-02 14/700 2026-04-02 21:10 by dongzh2009
[考研] 一志愿华南师范大学-22408计算机-292分-求华南师范大学调剂 +4 爱读书的小鳄鱼 2026-04-02 4/200 2026-04-02 18:35 by 求调剂zz
[考研] 318求调剂，计算材料方向 +10 吸喵有害笙命 2026-04-01 11/550 2026-04-02 16:29 by oooqiao
[考研] 085602化学工程268分蹲调剂 +8 月照花林。 2026-04-01 8/400 2026-04-01 22:08 by 无际的草原
[考研] 085600 一志愿9 总分351 求调剂学校 +7 czhcz 2026-03-31 9/450 2026-04-01 19:24 by 无际的草原
[考研] 288资源与环境专硕求调剂，不限专业，有学上就行 +25 lllllos 2026-03-30 26/1300 2026-04-01 09:52 by 一只好果子?
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭