24小时热门版块排行榜    

查看: 5676  |  回复: 25
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

田甜思

新虫 (初入文坛)

[求助] 蛋白表达分子量偏大 已有1人参与

最近在做重组蛋白表达,表达之后也有目的条带,但是就是分子量比理论值要偏大。我的质粒是经过测序的,没有碱基的缺失和突变。另外,我做的是SDS-PAGE.偏大5-50都不等,各位大师帮帮忙,解决下...  着急啊!!!
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tigertang

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-06-10 13:14:13
1.如果你是在动物细胞里表达重组蛋白,因为翻译后修饰的存在(如磷酸化、乙酰化、泛素化等),蛋白比预测大一点比较正常,如果特别纠结,加一个原核表达的蛋白作为对照(去除标签)

2. 也有一些跟预测大小差别比较大的情况,如人的SIRT1,预测82kd左右,western Blot检测癌细胞一般接近120kd

所以建议你参考你研究蛋白的文献、抗体公司提供的datasheet,综合考量分析原因。
14楼2013-03-15 09:22:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 26 个回答

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
SDS-PAGE确定的分子量不是很准确的,有些蛋白的疏水性强,等电点高,在胶上跑得慢也不足为奇。只要确定表达的蛋白正确就可以了。
2楼2013-03-13 00:21:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

linxt2005

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
有些偏大很常见的,可以通过表达测试时设置阴性对照来初步确认。
进一步确认可以通过活性检测。
小兵一个
3楼2013-03-13 13:13:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

田甜思

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-03-13 00:21:10
SDS-PAGE确定的分子量不是很准确的,有些蛋白的疏水性强,等电点高,在胶上跑得慢也不足为奇。只要确定表达的蛋白正确就可以了。

哦 谢谢
4楼2013-03-13 16:36:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +7 wangze12014 2026-08-14 8/400 2026-08-17 12:45 by a441914426
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜? +12 Ldrop2023 2026-08-13 13/650 2026-08-17 12:33 by gltch
[基金申请] 今天系统多次维护,明天很可能放榜! +8 zju2000 2026-08-16 9/450 2026-08-17 12:20 by lmz0216
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 i7NFEVbjQMM5 2026-08-16 4/200 2026-08-17 12:10 by 4GBAYCdVQoK3
[论文投稿] 岩土工程学报什么时候才能终审完呐 25+3 yeager111 2026-08-10 4/200 2026-08-16 20:42 by tfang
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +13 archvillain 2026-08-15 25/1250 2026-08-16 20:13 by zhaosm1982
[基金申请] 2027广东省杰青 +3 奶牛小黑 2026-08-15 6/300 2026-08-16 20:07 by 奶牛小黑
[基金申请] 快农历七夕节了,轻松一下,男人悄悄话,女施主请不要进来。 +3 Tide man 2026-08-14 3/150 2026-08-16 17:47 by jurkat.1640
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +7 启萌科技 2026-08-12 26/1300 2026-08-16 12:35 by 启萌科技
[基金申请] 有时候,自然基金真的不能太认真 (我的申报经验) +10 majunge000 2026-08-11 12/600 2026-08-16 08:18 by xli1984
[基金申请] 各位道友,我要去昆明玩几天,回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果? +4 yuleib84 2026-08-11 4/200 2026-08-14 23:05 by lfy8008
[硕博家园] 读博的好处 +4 lnee 2026-08-11 4/200 2026-08-14 10:20 by ahsoarli
[基金申请] filecode +15 documentary 2026-08-10 17/850 2026-08-14 10:08 by kissu88
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] Filecode 又变了,巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见,大家看看几个A,几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 帮忙看看fileCode +7 wwncly 2026-08-10 13/650 2026-08-11 19:36 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 什么时候出结果,有咨询渠道??? +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
[基金申请] 确定了,国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
信息提示
请填处理意见