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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 蛋白表达分子量偏大
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田甜思

新虫 (初入文坛)

[求助] 蛋白表达分子量偏大 已有1人参与

最近在做重组蛋白表达，表达之后也有目的条带，但是就是分子量比理论值要偏大。我的质粒是经过测序的，没有碱基的缺失和突变。另外，我做的是SDS-PAGE.偏大5-50都不等，各位大师帮帮忙，解决下...  着急啊！！！
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1楼 2013-03-12 20:26:46
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Phyrce

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
9楼: Originally posted by 田甜思 at 2013-03-14 15:37:17
是这样的，我的理论值是70KD,但是在脚上的为止已经有120KD了，还有一个样品的理论值是37KD，胶上就是四十多了，还有请教一下蛋白序列的亲疏水性怎么判别呢...

请问下你这两个蛋白是分别跑的胶么？
如果跑分子量大的蛋白，可以用浓度低点的胶， 这样会比较准确。不然来不及扩展开就电泳停了。

蛋白中氨基酸，非极性多的表现为疏水，极性多的表现为亲水。
一般蛋白内部以非极性氨基酸为主，外部会多点极性的。
如果要准确预测，有软件可以算序列的物理特性的。详细你可以上ExPASy 看看
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11楼2013-03-14 17:25:32
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
SDS-PAGE确定的分子量不是很准确的，有些蛋白的疏水性强，等电点高，在胶上跑得慢也不足为奇。只要确定表达的蛋白正确就可以了。
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2楼2013-03-13 00:21:10
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linxt2005

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
有些偏大很常见的，可以通过表达测试时设置阴性对照来初步确认。
进一步确认可以通过活性检测。
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小兵一个
3楼2013-03-13 13:13:03
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田甜思

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-03-13 00:21:10
SDS-PAGE确定的分子量不是很准确的，有些蛋白的疏水性强，等电点高，在胶上跑得慢也不足为奇。只要确定表达的蛋白正确就可以了。

哦 谢谢
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4楼2013-03-13 16:36:40
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