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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 光谱分析 » 关于荧光物质激发波长的问题
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dearlanli

新虫 (初入文坛)

[求助] 关于荧光物质激发波长的问题

我在做细胞内活性氧的测定,用的是2 ,7 -dichlorodihydrofluorescein diacetate
(H2DCFDA)做染色剂,按照文献的步骤对细胞进行处理后用荧光分光光度计测量.我看的文献用的是蔡司的荧光显微镜,其发射波长是520,激发是485,其他文献也差不多都是这个值,可是我用我们实验室的荧光分光光度计扫出来的激发是260,发射是520. 我已经重复过实验了,而且样品处理应该是不会有问题的,我每次自己扫出来的都一样,那为什么会差这么多呢?这是不是说明我的前处理一定有问题,还是存在这样的现象?
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1楼 2013-03-10 22:06:56
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chaijudi

至尊木虫 (著名写手)
错了，避开倍频峰
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4楼2013-03-11 12:59:03
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chaijudi

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
dearlanli: 金币+1, ★★★很有帮助 2013-03-14 10:17:46
实验室的荧光分光光度计扫出来的激发是260,发射是520.  这个实验结果是错误的，倍频闪射峰
你以520nm为发射，从300nm开始测定激发谱
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2楼2013-03-11 09:00:01
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dearlanli

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by chaijudi at 2013-03-11 09:00:01
实验室的荧光分光光度计扫出来的激发是260,发射是520.  这个实验结果是错误的，倍频闪射峰
你以520nm为发射，从300nm开始测定激发谱

我的方法是  1   固定激发485  扫发射   扫的520
                   2  固定发射  520    扫激发    扫的260
                   3  固定激发260  扫发射   扫的520
                  看的数值  在485的吸收峰很小
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3楼2013-03-11 10:36:59
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supeicheng

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
固定发射波长为520nm扫激发波长的时候，波长范围从300nm开始，这样能避开260nm的半频峰,扫出的300nm后出现的峰为激发峰，其波长为激发波长。
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5楼2013-03-11 13:52:24
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