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湖畔狂想

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[交流] 蛋白体液中加甘油和蔗糖的作用是什么？已有3人参与

蛋白提取液中有加甘油的，也有加蔗糖的。
请问他们的作用是什么，区别是什么？

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1楼2013-03-10 11:51:14

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引用回帖:

5楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-03-10 15:21:20
主要是维持一定的渗透压，有助于破碎细胞。你提取蛋白的时候是在native条件下把，一般要求冰上操作，蔗糖和甘油在低温下对蛋白有一定的保护作用，稳定蛋白结构。甘油有类似膜脂的结构，所以在分离纯化大分子膜蛋白的 ...

为什么是稳定蛋白结构呢，提取蛋白时，不是要断开二硫键、氢键等次级键，破坏掉它的结构吗？
这是步骤：
将材料加液氮研碎成粉末状，加入少许PVP-40及含50mMTris-HCl(pH7．8)、10％v/v加甘油、1mM EDTANa2、lmM PMSF和2％v/v巯基乙醇的抽提缓冲液I继续匀浆。
沉淀再用含有100mM磷酸缓冲液(pH7．1)、10％v/v甘油、200mM KCl、2mM MgS04.7H2O、1mM EDTANa2、2％w/V CHAPs、1mM PMSF和2％v/v巯基乙醇的抽提缓冲液Ⅱ悬浮起来。
轻轻摇匀30min后，加入7M Urea、2M硫脲、3mM DTT在室温继
续摇匀30min。再22400rpm离心3 min，取上清与上次所得上清液汇合。
对上清液中的总蛋白质进行酚抽提，加入等体积Tris饱和酚，振荡30min。再离心3min，15000rpm，4℃。取酚相再加入5倍体积0.1M乙酸胺(甲醇配制)，4℃静置至出现沉淀为止。离心30min，15000rpm，4℃。用丙酮(含13mMDTT)洗涤两次。最后，-40℃冰冻干燥蛋白质成干粉状。
求指教！