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湖畔狂想

金虫 (小有名气)

[交流] 蛋白体液中加甘油和蔗糖的作用是什么? 已有3人参与

蛋白提取液中有加甘油的,也有加蔗糖的。
请问他们的作用是什么,区别是什么?
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湖畔狂想

金虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-03-10 15:21:20
主要是维持一定的渗透压,有助于破碎细胞。你提取蛋白的时候是在native条件下把,一般要求冰上操作,蔗糖和甘油在低温下对蛋白有一定的保护作用,稳定蛋白结构。甘油有类似膜脂的结构,所以在分离纯化大分子膜蛋白的 ...

为什么是稳定蛋白结构呢,提取蛋白时,不是要断开二硫键、氢键等次级键,破坏掉它的结构吗?
这是步骤:
将材料加液氮研碎成粉末状,加入少许PVP-40及含50mMTris-HCl(pH7.8)、10%v/v加甘油、1mM EDTANa2、lmM PMSF和2%v/v巯基乙醇的抽提缓冲液I继续匀浆。
沉淀再用含有100mM磷酸缓冲液(pH7.1)、10%v/v甘油、200mM KCl、2mM MgS04.7H2O、1mM EDTANa2、2%w/V CHAPs、1mM PMSF和2%v/v巯基乙醇的抽提缓冲液Ⅱ悬浮起来。
轻轻摇匀30min后,加入7M Urea、2M硫脲、3mM DTT在室温继
续摇匀30min。再22400rpm离心3 min,取上清与上次所得上清液汇合。
对上清液中的总蛋白质进行酚抽提,加入等体积Tris饱和酚,振荡30min。再离心3min,15000rpm,4℃。取酚相再加入5倍体积0.1M乙酸胺(甲醇配制),4℃静置至出现沉淀为止。离心30min,15000rpm,4℃。用丙酮(含13mMDTT)洗涤两次。最后,-40℃冰冻干燥蛋白质成干粉状。
求指教!
7楼2013-03-10 17:19:18
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rice1007

禁虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
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2楼2013-03-10 13:41:22
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湖畔狂想

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by rice1007 at 2013-03-10 13:41:22
我个人觉得,这两个东东主要是密度大,上样电泳时起到沉降作用的哟,不至于蛋白上样时飘起来。

蛋白比他俩沉吧。。。
3楼2013-03-10 13:51:28
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rice1007

禁虫 (正式写手)

★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
wizardfan: 金币+3, 谢谢分享经验 2013-03-11 09:00:32
本帖内容被屏蔽

4楼2013-03-10 13:55:01
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