24小时热门版块排行榜    

查看: 944  |  回复: 4
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

ripplings

金虫 (小有名气)

[求助] GST柱结合能力越来越低

我一个蛋白在大肠杆菌里表达,有GST标签,用GST介质结合本来效果就不好,加了Triton处理结合能力稍有提高,最近亲和效果越来越差了,好像蛋白有脾气似的。介质有换新的,装的是常压柱,缓冲液重新配置了也没有改善。
    请问,还有什么办法能提高GST的亲和能力呢?
回复此楼
慢,是一种失传已久的艺术。
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gaojuan1985

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

具体原理我也说不出来了还是要检查一下蛋白的情况和缓冲液的pH,说明书上面是说pH要在6.5到8.0之间。我们之前碰到过pH高于8.5,结果既不好结合,结合上去的也不容易洗下来。
5楼2013-03-13 19:55:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 5 个回答

gaojuan1985

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
ripplings: 金币+4, ★★★很有帮助 2013-03-13 18:38:08
GST柱的结合的确是相对较慢较低。所以在结合的时候,也只能通过加Triton X-100、DTT、延长吸附时间等来提高吸附量。
如果是你的蛋白以前吸附还可以,现在吸附不好了,那么除了找介质的原因以外,还要找你蛋白的原因。是不是表达条件什么的有变化了?
2楼2013-03-08 08:25:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lihuan0525

金虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
ripplings: 金币+3, 有帮助 2013-03-13 18:38:18
是不是柱子没有装好,或者是温度,PH等有了变化。
3楼2013-03-08 09:35:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ripplings

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by gaojuan1985 at 2013-03-08 08:25:40
GST柱的结合的确是相对较慢较低。所以在结合的时候,也只能通过加Triton X-100、DTT、延长吸附时间等来提高吸附量。
如果是你的蛋白以前吸附还可以,现在吸附不好了,那么除了找介质的原因以外,还要找你蛋白的原因 ...

请问Triton X-100提高吸附量的原理是什么?我只知道有一定作用
慢,是一种失传已久的艺术。
4楼2013-03-13 18:37:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[文学芳草园] 梦想 +5 myrtle 2026-08-26 5/250 2026-08-31 14:40 by hahaboy
[基金申请] 29号明天会评吗 +4 笨笨唐 2026-08-28 4/200 2026-08-31 09:30 by huixian257
[基金申请] 国社科又开始会评了,不知道这次命运如何 +6 雨打竹帘 2026-08-30 10/500 2026-08-31 09:29 by huixian257
[基金申请] 基金不中,共勉 +12 eulota 2026-08-26 12/600 2026-08-31 08:42 by ZJTJZ
[基金申请] 能否申诉? +6 echo8914667 2026-08-30 7/350 2026-08-31 08:41 by kingkocxr
[基金申请] 为什么到现在没收到通知? +5 tannykie 2026-08-29 5/250 2026-08-30 21:05 by purplejack
[考博] 找导师 +6 yuanjiabao 2026-08-29 7/350 2026-08-30 14:40 by 生科新手
[基金申请] 麻烦专家们看看评委们的意见(F口面上) +6 gdd2018 2026-08-28 11/550 2026-08-30 08:58 by 超级无敌华子
[基金申请] 我就是申请一个面上项目而已,这评审意见是按照杰青的条件评的吧? +6 gouxfjh 2026-08-28 11/550 2026-08-30 07:57 by gouxfjh
[基金申请] 2026年叶企孙基金 +4 bud_bud 2026-08-27 7/350 2026-08-29 07:23 by foolishmani
[基金申请] 系统查不到 +11 董八千 2026-08-26 11/550 2026-08-28 18:06 by Leogzhya
[基金申请] 怎么查啊 +6 huang1991js 2026-08-26 6/300 2026-08-28 08:42 by winsaint
[基金申请] 哪位高人中了,把查询到的截图贴出来让我看看,让我长长见识 +5 yuleib84 2026-08-26 6/300 2026-08-28 00:02 by yudaoqian88
[基金申请] 面上合作单位盖章 +5 ssyjh 2026-08-27 5/250 2026-08-27 20:50 by gdfollow
[基金申请] 基金未中,这种答复是模板吗? +5 zhaosm1982 2026-08-27 6/300 2026-08-27 16:00 by lfy8008
[基金申请] 为什么 国际(地区)合作与交流项目 没有放榜? 10+3 majunge000 2026-08-26 11/550 2026-08-27 08:42 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 我不理解! +15 Edward_pc 2026-08-26 23/1150 2026-08-26 20:34 by zzuzxg
[基金申请] 2026年8月25日国自然放榜前突然收到列入评审专家邮件,有关系吗? +25 木水思豆 2026-08-25 28/1400 2026-08-26 14:53 by draco1987
[基金申请] 国合里面能看到了 +7 一怀馨秋 2026-08-26 7/350 2026-08-26 11:23 by zhaosm1982
[基金申请] 国际合作可查了,中了面上 (EPI+1)(金币+50) +18 Ldrop2023 2026-08-26 18/900 2026-08-26 11:15 by cmrandy
信息提示
请填处理意见