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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » GST柱结合能力越来越低
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ripplings

金虫 (小有名气)

[求助] GST柱结合能力越来越低

我一个蛋白在大肠杆菌里表达，有GST标签，用GST介质结合本来效果就不好，加了Triton处理结合能力稍有提高，最近亲和效果越来越差了，好像蛋白有脾气似的。介质有换新的，装的是常压柱，缓冲液重新配置了也没有改善。
    请问，还有什么办法能提高GST的亲和能力呢？
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慢，是一种失传已久的艺术。
1楼 2013-03-08 06:54:07
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gaojuan1985

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
ripplings: 金币+4, ★★★很有帮助 2013-03-13 18:38:08
GST柱的结合的确是相对较慢较低。所以在结合的时候，也只能通过加Triton X-100、DTT、延长吸附时间等来提高吸附量。
如果是你的蛋白以前吸附还可以，现在吸附不好了，那么除了找介质的原因以外，还要找你蛋白的原因。是不是表达条件什么的有变化了？
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2楼2013-03-08 08:25:40
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lihuan0525

金虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
ripplings: 金币+3, ★有帮助 2013-03-13 18:38:18
是不是柱子没有装好，或者是温度，PH等有了变化。
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3楼2013-03-08 09:35:29
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ripplings

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gaojuan1985 at 2013-03-08 08:25:40
GST柱的结合的确是相对较慢较低。所以在结合的时候，也只能通过加Triton X-100、DTT、延长吸附时间等来提高吸附量。
如果是你的蛋白以前吸附还可以，现在吸附不好了，那么除了找介质的原因以外，还要找你蛋白的原因 ...

请问Triton X-100提高吸附量的原理是什么？我只知道有一定作用
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慢，是一种失传已久的艺术。
4楼2013-03-13 18:37:52
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gaojuan1985

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

具体原理我也说不出来了还是要检查一下蛋白的情况和缓冲液的pH，说明书上面是说pH要在6.5到8.0之间。我们之前碰到过pH高于8.5，结果既不好结合，结合上去的也不容易洗下来。
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5楼2013-03-13 19:55:36
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