| 查看: 809 | 回复: 3 | ||
[求助]
抑制性差减杂交结果分析 急 急！！
|
|
两次PCR末端补平两轮差减后的eDNA群体，用与接头外侧序列对应 的一对巢式引物进行PCR扩增。PCR反应中，a和d型分子缺乏引物结合位点而得 不到扩增；c型分子只在一端具有引物结合位点，所以得到线形扩增；b型分子两端 具对称接头，在PCR反应的复性过程中，长的末端反向重复序列容易分子内自我复 性形成“锅一柄”结构，阻抑了这种非特异性扩增，此即抑制PCR作用(Siebertet a1．，1995)。两端具不同接头的e类分子得到指数级扩 怎么就a d缺乏引物结合位点了 怎么就不能扩增了。还有b怎么就自我复制了 实在不明白了 求解？？？？？？？？  裁剪.jpg [ Last edited by 学术问题 on 2013-3-5 at 21:22 ] |
回复此楼» 猜你喜欢
透明质酸酶的作用机制：如何实现药物递送
已经有0人回复
-
爱思维尔旗下LWT投稿
已经有9人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有176人回复
-
替拉扎明为缺氧选择性细胞毒药物研究提供新思路
已经有0人回复
-
拉坦前列腺素(Latanoprost)：前列腺素F2α衍生物如何成为青光眼一线用药
已经有0人回复
-
卟啉家族中的明星分子：MESO-四(3,5-二溴-4-羟基苯基)卟啉的性质与制备
已经有1人回复
-
宠物寄生虫防治：氟雷拉纳阻断GABA受体，持效12周驱杀跳蚤蜱虫
已经有0人回复
-
为呼吸打开通道：依伐卡托的科学之旅
已经有1人回复
-
Dordaviprone（ONC201）：小分子药物在中线胶质瘤中的应用
已经有0人回复
-
依喜替康：新型喜树碱衍生物的研究进展
已经有1人回复
-
膀胱癌靶向治疗新选择：厄达替尼作用机制与耐药研究进展
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 抑制性差减杂交PCR中文说明书
已经有21人回复
- 中草药生物技术-唐克轩
已经有133人回复
- 做抑制差减杂交SSH都需要买哪些试剂盒？
已经有3人回复
- 基因芯片和抑制性消减杂交哪个更好？哪家公司的服务比较好？
已经有2人回复
- 【求助/交流】基因芯片和抑制性消减杂交哪个更好？哪家公司的服务比较好？
已经有6人回复
随波逐刘
新虫 (小有名气)
- 应助: 3 (幼儿园)
- 金币: 91.2
- 散金: 8
- 帖子: 63
- 在线: 36.7小时
- 虫号: 1455710
- 注册: 2011-10-22
- 性别: GG
- 专业: 中药质量评价
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★
kx444555: 金币+4, 鼓励交流 2013-09-20 20:10:54
kx444555: 金币+4, 鼓励交流 2013-09-20 20:10:54
|
先说a：PCR单链无法扩增 d：无接头，而引物结合位点在接头上，引物结合不上，怎么扩增？ b：PCR退火时，指的是引物与载体的结合，其实就是碱基互补配对，而链内退火速度是远远快于链间退火的，接头是反向互补的，退火时容易自身互补，引物就连不上了，抑制性 c：单向接头，只能线性扩增，循环30次的话，扩增30次，而e可以扩增2的30次方（理论上） 经过第一轮PCR，可以使非差异片段比例降低，但还是有，同时，差异片段浓度往往不高，一般循环27次电泳不是很明显，所以得经过缫丝PCR，可以明显富集差异基因了。。。 |
2楼2013-09-17 00:04:59
3楼2013-09-22 16:06:12
4楼2017-10-05 17:33:58
30