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抑制性差减杂交结果分析 急 急！！
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两次PCR末端补平两轮差减后的eDNA群体，用与接头外侧序列对应 的一对巢式引物进行PCR扩增。PCR反应中，a和d型分子缺乏引物结合位点而得 不到扩增；c型分子只在一端具有引物结合位点，所以得到线形扩增；b型分子两端 具对称接头，在PCR反应的复性过程中，长的末端反向重复序列容易分子内自我复 性形成“锅一柄”结构，阻抑了这种非特异性扩增，此即抑制PCR作用(Siebertet a1．，1995)。两端具不同接头的e类分子得到指数级扩 怎么就a d缺乏引物结合位点了 怎么就不能扩增了。还有b怎么就自我复制了 实在不明白了 求解？？？？？？？？  裁剪.jpg [ Last edited by 学术问题 on 2013-3-5 at 21:22 ] |
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【答案】应助回帖
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kx444555: 金币+4, 鼓励交流 2013-09-20 20:10:54
kx444555: 金币+4, 鼓励交流 2013-09-20 20:10:54
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先说a：PCR单链无法扩增 d：无接头，而引物结合位点在接头上，引物结合不上，怎么扩增？ b：PCR退火时，指的是引物与载体的结合，其实就是碱基互补配对，而链内退火速度是远远快于链间退火的，接头是反向互补的，退火时容易自身互补，引物就连不上了，抑制性 c：单向接头，只能线性扩增，循环30次的话，扩增30次，而e可以扩增2的30次方（理论上） 经过第一轮PCR，可以使非差异片段比例降低，但还是有，同时，差异片段浓度往往不高，一般循环27次电泳不是很明显，所以得经过缫丝PCR，可以明显富集差异基因了。。。 |
2楼2013-09-17 00:04:59
3楼2013-09-22 16:06:12
4楼2017-10-05 17:33:58