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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助 双向电泳提取的蛋白质 其浓度用什么测呀？
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lws9930

至尊木虫 (职业作家)
引用回帖:
10楼: Originally posted by darkarrow at 2013-03-07 11:44:22
还有一种比较tricky的方法就是rehydration溶解后的样品，泡个SDS-PAGE，然后可以normlize上杨量，如果要相对定量的话，可以同时泡个已知浓度的BSA，然后比较intensity...

嗯，这个之前还真没想到呢。下次试着做做，用不同浓度的BSA跑着比比看。多谢了！！！
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11楼2013-03-07 17:02:41
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张鹏8902

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
lws9930: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-04-13 11:35:31
生工有个试剂盒SK3071还不错，受盐离子干扰比较小。
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你若盛开，清风自来
12楼2013-04-11 13:41:20
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lws9930

至尊木虫 (职业作家)
引用回帖:
12楼: Originally posted by 张鹏8902 at 2013-04-11 13:41:20
生工有个试剂盒SK3071还不错，受盐离子干扰比较小。

嗯哪，买到那个盒子了，感觉还不错，谢谢支招！
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13楼2013-04-13 11:35:07
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
lws9930: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-04-20 09:54:31
除了以上各位所言（都很有道理），楼主是否可以再考虑一下:增加所提的蛋白质样品的溶解度，比如适量增减变性试剂浓度或类型，加大离子型、非离子型或两性离子表面活性剂的浓度或类型，加大DTT浓度，适当调整PH稍微主要研究的蛋白质的等电点。
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14楼2013-04-19 23:51:01
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学术茹

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by lws9930 at 2013-03-07 09:05:01
追问一下，请问你在做双向电泳时，等电聚焦前一般是让胶面与蛋白接触后溶胀多久比较合适？？？...

这要看你做的是多少厘米的胶条7cm的一般12,13h 17cm一般16h
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15楼2013-12-16 20:45:46
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biot

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

用bradford法，也就是考马斯亮蓝染色，很适合，干扰少

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扬帆起航！
16楼2013-12-16 22:54:01
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七小艾

新虫 (小有名气)
引用回帖:
16楼: Originally posted by biot at 2013-12-16 22:54:01
用bradford法，也就是考马斯亮蓝染色，很适合，干扰少

可是看GE的手册，说是考马斯亮蓝会与其中的buffer、CHAPS等结合，是这样吗？如果用考马斯亮蓝法，标准蛋白是不是要另外购买，找不到订购信息，可否告知呀？？
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17楼2014-07-28 20:02:20
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