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nickey910

木虫之王 (职业作家)

[交流] 怎样保证离体大鼠脑组织中ATP不被分解？

各位战友，有谁做过脑缺血再灌注试验，离体脑组织中ATP的液相含量测定，怎样保证离体大鼠脑组织中ATP不被分解，现在我用的样品处理方法是取0.3g脑组织，立即用0.5mol/L高氯酸溶液2ml在冰水浴充分匀浆静置10min，0~4℃以3000rpm离心10min，取上清加入0.5mol/L氢氧化钾调ph为6.5，再以10000rpm离心10min，取上清进样走液相。液相色谱条件为色谱柱Hypersil ODS C18  250mm*4.6mm，柱温40℃，检测波长254nm，流动相A：70mmol/L磷酸二氢钠+3mmol/L四丁基溴化铵（调ph6.5），流动相B：甲醇。A:B=90:10，流速1ml/min。
现在的问题是对照品出峰顺序为AMP 7.3min，ADP  14.4min，ATP  27.2min，分离效果挺好，但是样品中的ADP和ATP检测不出来，基线就是平的，很郁闷，不知是哪里出了问题，是ATP分解了吗，还是别的原因，请帮忙分析一下，非常感谢
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1楼 2013-03-05 14:42:11
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nickey910

木虫之王 (职业作家)
请教高人
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2楼2013-03-06 09:41:35
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userhung

禁虫 (文学泰斗)
★
nickey910(金币+1): 谢谢参与
http://www.lunwentianxia.com/product.sf.3534293.1/
http://www.docin.com/p-233698921.html
http://www.cnki.com.cn/Article/CJFDTotal-SLYY200703067.htm
http://www.cnki.com.cn/Article/CJFDTotal-BQEB801.009.htm
http://wuxizazhi.cnki.net/Search/SHZD200402020.html
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3楼2013-03-06 09:59:23
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wy0720

铜虫 (职业作家)
★
nickey910(金币+1): 谢谢参与
养的兔子又死了一只，好无语阿。。。。感觉兔子还没有大鼠好养呢。。。。
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7楼2013-03-06 11:59:01
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readytogo

荣誉版主 (文学泰斗)
★
nickey910(金币+1): 谢谢参与
学习啦，很有兴趣
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9楼2013-03-06 17:51:22
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wangyuanji

银虫 (小有名气)
★
nickey910(金币+1): 谢谢参与
我们这边做过这几种物质的测定，但最终ADP没有测出来，有可能是稳定性极差。
给你一个样品前处理方法，供你参考：取大鼠心脏，称量，按一比二的比例加7%高氯酸沉淀蛋白并且匀浆，低温10000g离心20分钟，取上清，调节PH=6~7，再低温4000g离心10分钟，取上清，-200C保存。测试样本为处理好的细胞裂解液。
还有，你的色谱条件中柱温是否偏高？40摄氏度？调低试试看。
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15楼2013-03-07 16:59:18
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kk1424

主管区长 (著名写手)
★
nickey910(金币+1): 谢谢参与
好专业，坐等回答
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16楼2013-03-07 21:04:55
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nickey910

木虫之王 (职业作家)
引用回帖:
15楼: Originally posted by wangyuanji at 2013-03-07 16:59:18
我们这边做过这几种物质的测定，但最终ADP没有测出来，有可能是稳定性极差。
给你一个样品前处理方法，供你参考：取大鼠心脏，称量，按一比二的比例加7%高氯酸沉淀蛋白并且匀浆，低温10000g离心20分钟，取上清，调 ...

你好，谢谢你的回复。非常感谢。但是我有一个问题，我现在做的是大鼠脑缺血再灌注实验，取缺血区大脑皮层，也就是只有200到300mg，按照1:2的比例加入7%高氯酸，也就只加入600微升，这么小的量怎么用PH计测定啊？
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17楼2013-03-07 22:12:53
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wangyuanji

银虫 (小有名气)
引用回帖:
17楼: Originally posted by nickey910 at 2013-03-07 22:12:53
你好，谢谢你的回复。非常感谢。但是我有一个问题，我现在做的是大鼠脑缺血再灌注实验，取缺血区大脑皮层，也就是只有200到300mg，按照1:2的比例加入7%高氯酸，也就只加入600微升，这么小的量怎么用PH计测定啊？...

也就是调节样品酸度至中性，试纸即可。
我做的也是大鼠脑缺血再灌注方面的。可以多多交流。
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18楼2013-03-08 14:27:36
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nickey910

木虫之王 (职业作家)
引用回帖:
18楼: Originally posted by wangyuanji at 2013-03-08 14:27:36
也就是调节样品酸度至中性，试纸即可。
我做的也是大鼠脑缺血再灌注方面的。可以多多交流。...

呵呵，应该向你多多学习才是。貌似pH这个环节不是太重要，只要调节成中性即可。呵呵，学习了。
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19楼2013-03-08 16:24:38
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nickey910

木虫之王 (职业作家)
求高人
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20楼2013-03-11 11:18:15
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nickey910

木虫之王 (职业作家)
请教高人
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21楼2013-03-12 08:36:26
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nickey910

木虫之王 (职业作家)
请教高人
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22楼2013-03-13 13:53:20
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nickey910

木虫之王 (职业作家)
请高人解答
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23楼2013-03-15 12:46:33
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nickey910

木虫之王 (职业作家)
求高人解答
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24楼2013-03-18 09:06:45
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nickey910

木虫之王 (职业作家)
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25楼2013-09-30 12:09:08
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zhihaikou4楼
2013-03-06 10:24   回复  
nickey910(金币+1): 谢谢参与
祝福祝福
tangbohejin5楼
2013-03-06 10:25   回复  
nickey910(金币+1): 谢谢参与
wullww6楼
2013-03-06 11:04   回复  
nickey910(金币+1): 谢谢参与
zhoupeng878楼
2013-03-06 17:36   回复  
nickey910(金币+1): 谢谢参与
cfly10楼
2013-03-06 18:00   回复  
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yaoyao14511楼
2013-03-06 18:13   回复  
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mr2010053112楼
2013-03-06 18:34   回复  
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wgatssd13楼
2013-03-06 19:11   回复  
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champ14楼
2013-03-06 19:13   回复  
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