应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 全式金的表达载体pEASY-E2表达蛋白失败
51/1返回列表
查看: 2174  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

weizhi111

至尊木虫 (正式写手)

[求助] 全式金的表达载体pEASY-E2表达蛋白失败

谁用过全式金的表达载体pEASY-E2？我连接上了，测序正确，目的条带1000bp左右，用这个载体诱导表达，OD=0.4和OD 0.6都试了，IPTG浓度为0.8mM，诱导4h和过夜都试了，就是在诱导完的菌体总蛋白中没有看到明显的诱导后的目的带，而且我做了2个蛋白都这样，不知道为什么？有没有用过这个载体的大侠，请求分享经验，谢拉！
回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

weizhi111

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-03-04 22:47:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

weizhi111

至尊木虫 (正式写手)
送鲜花一朵
好的，谢谢。麻烦再问一下，一般做表达时稀有密码子要控制在什么范围内啊？我的序列长1300p，共30个稀有密码子？是不是太多了？而且有3个连在一起的
赞一下 回复此楼
6楼2013-03-07 18:00:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答

jiangyhai

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
为何不用别的载体试试呢？如pET系列。如果你在重组蛋白表达上有困难的话，我们可以帮您解决。
赞一下 回复此楼
静心做事。
2楼2013-03-05 08:17:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yesali

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
weizhi111: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-03-05 23:25:30
反正构建载体也就是一部重组的问题，在下次构建载体时，可以构建一个只带GFP的载体，你可以根据菌体的颜色来确定你的蛋白表达量。方便你调整IPTG的浓度和遇到时间。

当然你也可以换其他载体试试，如PET系列的，这种载体一般实验室都有，你可以找同学借。
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2013-03-05 10:18:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

weizhi111

至尊木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by yesali at 2013-03-05 10:18:00
反正构建载体也就是一部重组的问题，在下次构建载体时，可以构建一个只带GFP的载体，你可以根据菌体的颜色来确定你的蛋白表达量。方便你调整IPTG的浓度和遇到时间。

当然你也可以换其他载体试试，如PET系列的，这 ...

谢谢，以前用过pet系列，觉得酶切连接总是做不好，所以这次想偷懒，用了全式金的载体，理论上和pet载体只是有酶切位点的区别（不需酶切），其他没什么区别，但就是没表达好，不知为什么。另外我想问下关于GFP构建，是单独在载体上连GFP，还是将GFP连接在目的基因的下游？
赞一下 回复此楼
4楼2013-03-05 23:28:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-21 6/300 2026-08-23 14:21 by KM5EcsNQRBPn
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办？ +5 简单化xn 2026-08-22 10/500 2026-08-23 12:38 by 简单化xn
[基金申请] 2026国自然函评费到账 +15 羊腰板 2026-08-21 16/800 2026-08-23 10:45 by process2012
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-21 9/450 2026-08-23 10:44 by IXZuIJ2Q7OVy
[基金申请] 让我中一个面上吧！ +12 大萍1987 2026-08-20 14/700 2026-08-23 10:30 by wrm
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-21 10/500 2026-08-23 07:17 by OEbVnUOu01ol
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 DpSrDtM079iu 2026-08-22 5/250 2026-08-23 04:07 by OEbVnUOu01ol
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 7/350 2026-08-23 03:55 by OEbVnUOu01ol
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 6/300 2026-08-23 03:40 by OEbVnUOu01ol
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 QTy3jDtz1uLt 2026-08-21 9/450 2026-08-23 03:04 by OEbVnUOu01ol
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +7 且听虎啸 2026-08-17 8/400 2026-08-22 21:55 by 医学老男孩
[基金申请] 时间戳今天，20号变了 +5 archvillain 2026-08-20 5/250 2026-08-22 06:12 by hui_daxiao
[基金申请] 放榜前的不淡定 40+4 snowwithsea 2026-08-19 14/700 2026-08-21 23:51 by cratir
[基金申请] 今日不放榜？网传国自然预计 8 月 27 日可查结果 +16 医学老男孩 2026-08-20 20/1000 2026-08-21 21:13 by Ldrop2023
[基金申请] 看来今天不会放榜了？ +8 chengyan1220 2026-08-21 11/550 2026-08-21 17:52 by dcqxinyang
[基金申请] 时间戳又变了 +13 wuchongjun 2026-08-20 19/950 2026-08-21 17:21 by 紫杉醇
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +7 angus9576 2026-08-17 12/600 2026-08-21 13:38 by weiyin
[论文投稿] 投稿咨询 +5 wwm09 2026-08-17 7/350 2026-08-21 10:11 by 期刊论文帮手
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +9 yuleib84 2026-08-19 11/550 2026-08-21 10:06 by gltch
[基金申请] 今天系统多次维护，明天很可能放榜！ +10 zju2000 2026-08-16 11/550 2026-08-20 20:02 by cl479861084
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭