24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 1879  |  回复: 6

weizhi111

至尊木虫 (正式写手)

[求助] 全式金的表达载体pEASY-E2表达蛋白失败

谁用过全式金的表达载体pEASY-E2?我连接上了,测序正确,目的条带1000bp左右,用这个载体诱导表达,OD=0.4和OD 0.6都试了,IPTG浓度为0.8mM,诱导4h和过夜都试了,就是在诱导完的菌体总蛋白中没有看到明显的诱导后的目的带,而且我做了2个蛋白都这样,不知道为什么?有没有用过这个载体的大侠,请求分享经验,谢拉!
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jiangyhai

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
为何不用别的载体试试呢?如pET系列。如果你在重组蛋白表达上有困难的话,我们可以帮您解决。
静心做事。
2楼2013-03-05 08:17:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yesali

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
weizhi111: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-03-05 23:25:30
反正构建载体也就是一部重组的问题,在下次构建载体时,可以构建一个只带GFP的载体,你可以根据菌体的颜色来确定你的蛋白表达量。方便你调整IPTG的浓度和遇到时间。

当然你也可以换其他载体试试,如PET系列的,这种载体一般实验室都有,你可以找同学借。
3楼2013-03-05 10:18:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

weizhi111

至尊木虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by yesali at 2013-03-05 10:18:00
反正构建载体也就是一部重组的问题,在下次构建载体时,可以构建一个只带GFP的载体,你可以根据菌体的颜色来确定你的蛋白表达量。方便你调整IPTG的浓度和遇到时间。

当然你也可以换其他载体试试,如PET系列的,这 ...

谢谢,以前用过pet系列,觉得酶切连接总是做不好,所以这次想偷懒,用了全式金的载体,理论上和pet载体只是有酶切位点的区别(不需酶切),其他没什么区别,但就是没表达好,不知为什么。另外我想问下关于GFP构建,是单独在载体上连GFP,还是将GFP连接在目的基因的下游?
4楼2013-03-05 23:28:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yesali

木虫 (正式写手)

单独在载体上连GFP吧,连在基因下游有可能会对蛋白结构造成影响
5楼2013-03-06 08:49:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

weizhi111

至尊木虫 (正式写手)

送鲜花一朵
好的,谢谢。麻烦再问一下,一般做表达时稀有密码子要控制在什么范围内啊?我的序列长1300p,共30个稀有密码子?是不是太多了?而且有3个连在一起的
6楼2013-03-07 18:00:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ddtao

新虫 (小有名气)


7楼2016-04-02 12:51:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 weizhi111 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿华中农业071010,320求调剂 +11 困困困困坤坤 2026-04-14 12/600 2026-04-15 18:58 by zhuwenxu
[考研] 0854调剂 +13 长弓傲 2026-04-12 16/800 2026-04-15 13:45 by fenglj492
[考研] 药学305求调剂 +7 玛卡巴卡boom 2026-04-11 7/350 2026-04-15 13:21 by 西北望—风沙
[考研] 调剂求收留 +34 果然有我 2026-04-10 35/1750 2026-04-15 13:05 by 西北望—风沙
[考研] 335求调剂 +19 想上岸呀!! 2026-04-12 21/1050 2026-04-14 16:23 by Art1977
[考研] 求调剂 +20 MAX怅惘 2026-04-09 22/1100 2026-04-14 14:57 by 独醉梦孤城
[考研] 332求调剂 +15 蕉蕉123 2026-04-10 15/750 2026-04-13 23:12 by pies112
[考研] 一志愿中南大学 0855 机械 286 求调剂 +11 不会吃肉 2026-04-12 11/550 2026-04-13 21:59 by bljnqdcc
[考研] 一志愿211 0703化学 346分求调剂 +26 土豆er? 2026-04-09 29/1450 2026-04-13 15:15 by 独醉梦孤城
[考研] 一志愿双非085400电子信息344 求调剂,对材料和化学方向也感兴趣 +12 无情的小羊 2026-04-09 13/650 2026-04-13 14:17 by 张zhihao
[考研] 290求调剂 +18 柯淮然 2026-04-12 20/1000 2026-04-13 12:56 by cyh—315
[考研] 一志愿085802 323分求调剂 +13 drizzle_9 2026-04-12 14/700 2026-04-13 10:26 by Faiz5552
[硕博家园] 新一代电子信息294求调剂 不挑学校 +7 Ytyt11 2026-04-09 8/400 2026-04-12 16:57 by ajpv风雷
[考研] 0831生医工第一轮调剂失败求助 +12 小熊睿睿_s 2026-04-11 16/800 2026-04-12 16:28 by 钰璞
[考研] 调剂 +10 只叙离别辞 2026-04-09 12/600 2026-04-11 20:57 by 逆水乘风
[考研] 农学0904 312求调剂 +6 Say Never 2026-04-10 6/300 2026-04-11 10:33 by wwj2530616
[考研] 工科273调剂 +6 X1999 2026-04-09 7/350 2026-04-11 10:23 by zhq0425
[考研] 本科211 工科085400 280分求调剂 可跨专业 +11 LZH(等待调剂中 2026-04-10 11/550 2026-04-11 08:39 by zhq0425
[考研] 一志愿北理工298英一数二已上岸,感谢各位老师 +14 Reframe 2026-04-10 16/800 2026-04-10 23:07 by caotw2020
[考研] 314求调剂 +14 weltZeng 2026-04-09 14/700 2026-04-09 23:14 by wolf97
信息提示
请填处理意见